導(dǎo)語：如何才能寫好一篇免疫學(xué)定義，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

面試中哪些“死穴”碰不得？專業(yè)人士為求職者揭秘“解穴法”，讓求職者順利通過面試這一關(guān)。

“死穴”1抱怨上個(gè)東家

“你為什么要離職？”聽到面試官提問，應(yīng)聘者小齊開始大吐苦水：“我們的老板能力一般，卻總對(duì)自己的員工要求特別高。最可恨還是耳根軟，一些人本沒什么作為，就因?yàn)闀?huì)粉飾成績，老板就會(huì)格外賞識(shí)，這樣沒眼光的東家，不待也罷。”

解穴法：別拿面試當(dāng)“復(fù)仇”

職場人離職的原因有很多，其中也有不少問題源于曾經(jīng)的東家，但在面試中借機(jī)抱怨卻顯然不是明智的做法。一家企業(yè)管理顧問公司張經(jīng)理表示：“不少求職者在面試中會(huì)被問及離職原因，然而面試并不是讓你來找機(jī)會(huì)倒苦水的，要知道此時(shí)面試官正在觀察你的一言一行并在考慮是否錄用你。試想一下，如果是你，你愿意和那些經(jīng)常抱怨、批評(píng)別人的人一起工作嗎？答案肯定是否定的?，F(xiàn)在企業(yè)強(qiáng)調(diào)團(tuán)隊(duì)意識(shí)、合作精神，你抱怨其他人，正是暴露了自己不能夠和諧處理人際關(guān)系，無法面對(duì)工作中的沖突等弱點(diǎn)?！?/p>

“死穴”2不懂裝懂

求職者小吳在面試時(shí)為贏得企業(yè)好感，大贊應(yīng)聘企業(yè)如何知名，自己是如何向往，一副虔誠的模樣，但當(dāng)對(duì)方要求其做一下企業(yè)和業(yè)內(nèi)其他企業(yè)間的競爭力對(duì)比分析時(shí)，他卻啞口無言，顯然他對(duì)企業(yè)的了解僅停留在表面，很難同招聘方產(chǎn)生共鳴。

解穴法：知己知彼+虛心求教

面試的時(shí)候回答問題“知之為知之，不知為不知”，切忌不懂裝懂。面試時(shí)經(jīng)常是人力資源經(jīng)理及一些相應(yīng)部門的負(fù)責(zé)人，其中不乏業(yè)內(nèi)高手。因此，求職者在被問及一些專業(yè)性的問題時(shí)，如果一旦觸及自己的專業(yè)盲區(qū)，千萬不要慌張，切忌裝懂，最好是坦言告知對(duì)方，并虛心請(qǐng)教，為面試方留下誠實(shí)的印象。

“死穴”3跟面試官套近乎

直到面試結(jié)束，小姜都不知道是因?yàn)樽约阂痪洹拔艺J(rèn)識(shí)你們單位的某某”而被面試官淘汰出局。小姜所提之人是面試主管的頂頭上司，這樣突兀的提出，不免讓主管覺得他在利用自己的關(guān)系以勢(shì)壓人，更糟糕的是，平時(shí)這兩個(gè)人的關(guān)系又很緊張，小姜算是撞到槍口上，被淘汰也在情理之中。”知情人士透漏。

解穴法：刻意迎合讓人反感

篇2

患者，劉某，28歲，以“孕36周先兆子癇”于2010年5月28日緊急入住當(dāng)?shù)啬硧D幼保健院。入院后，接-診醫(yī)生行急診剖宮產(chǎn)手術(shù)，因術(shù)中出血較多、患者病情危重，術(shù)后醫(yī)生給患者輸血400 ml。該400 ml全血系市中心血站提供，有全套血液7項(xiàng)檢驗(yàn)合格的結(jié)果。不料，出院后1個(gè)月，劉某出現(xiàn)乏力、胃腸不適等癥狀，到市人民醫(yī)院就診，經(jīng)化驗(yàn)被確診為“急性丙型肝炎”，住院治療3個(gè)月。劉某認(rèn)為感染丙型肝炎是行剖宮產(chǎn)手術(shù)后輸血所致，于是出院后遂要求該婦幼保健院索賠，并將其訴至區(qū)法院。

法院判決

法院經(jīng)審理認(rèn)定，醫(yī)院及中心血站提供了全套血液檢驗(yàn)合格的手續(xù)，證明本次輸血過程中醫(yī)院沒有過錯(cuò)。因此，法院認(rèn)為醫(yī)院沒有醫(yī)療不當(dāng)行為，駁回了患方的訴訟請(qǐng)求。

[律師分析]

本案屬于醫(yī)療事故糾紛案件，在法律法規(guī)的適用上，優(yōu)先適用《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》，該法是針對(duì)醫(yī)療事故糾紛案件制定的法律規(guī)范。

根據(jù)我國《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第33條的規(guī)定，有6種不良后果或醫(yī)療意外情形不屬于醫(yī)療事故。包括本案中醫(yī)方恰恰存在的情形，即無過錯(cuò)輸血感染造成不良后果的。據(jù)此，可認(rèn)定本案中醫(yī)方無過錯(cuò)輸血感染造成不良后果的，包含于“不屬于醫(yī)療事故”的范圍。

而且，按照我國《侵權(quán)責(zé)任法》的相關(guān)規(guī)定，即便在醫(yī)療機(jī)構(gòu)舉證證明的情況下，也不排除是由于患者自身原因（輸血、吸毒、不潔）造成的感染。按照該項(xiàng)規(guī)定，亦不能夠認(rèn)定醫(yī)院存在過錯(cuò)，醫(yī)院自然也不需承擔(dān)賠償?shù)姆韶?zé)任。

目前，輸血引起感染的糾紛較多，若在《獻(xiàn)血法》實(shí)施后，醫(yī)療機(jī)構(gòu)不自行采供血、中心血站的血液檢驗(yàn)項(xiàng)目又符合衛(wèi)生部的有關(guān)要求，醫(yī)療機(jī)構(gòu)完全可以對(duì)所用血液引起的感染免除責(zé)任。因此，嚴(yán)格執(zhí)行《獻(xiàn)血法》對(duì)減少由獻(xiàn)血引起的糾紛非常重要。用血前須反復(fù)核實(shí)各項(xiàng)指標(biāo)

需要指出的是，本案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)已經(jīng)提供了證據(jù)，來證明本醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸注的血液是按照規(guī)定取自當(dāng)?shù)匮褐行模⒃谑中g(shù)中已進(jìn)行了相關(guān)的化驗(yàn)和檢測(cè)，在沒有任何問題的情況下為患者輸血。因此，醫(yī)療機(jī)構(gòu)不存在醫(yī)療過錯(cuò)行為。這也提示醫(yī)師，在臨床執(zhí)業(yè)過程中，應(yīng)該嚴(yán)格按照醫(yī)療法律法規(guī)和執(zhí)業(yè)規(guī)范，在用血前認(rèn)真復(fù)查、復(fù)檢血液的各項(xiàng)化驗(yàn)指標(biāo)、血型、傳染性疾病，認(rèn)真核對(duì)供血者與用血者的姓名、性別、住院號(hào)碼等，確保信息的真實(shí)、有效。醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)嚴(yán)格按照當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門認(rèn)定的采血機(jī)構(gòu)，申請(qǐng)和提供血液及其制品，如果是血液病?？漆t(yī)療機(jī)構(gòu)，有自行采血和分離技術(shù)及條件的，務(wù)必按照當(dāng)?shù)匦l(wèi)生部門的要求，辦理年檢、審核、批準(zhǔn)手續(xù)。對(duì)于采集、分離和化驗(yàn)血液樣品的，務(wù)必保留相關(guān)的化驗(yàn)、檢測(cè)數(shù)據(jù)，并且需要保留足夠的時(shí)間長度。

告知及保存證據(jù)同樣重要

篇3

【關(guān)鍵詞】 胰島素（IRI）；光量子數(shù)；前胰島素原；胰島素原；化學(xué)發(fā)光免疫法

【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood， centrifugalize them respectively to get the serum，which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0～335.0mIU/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI，10.1mIU/L IRI， 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808，30350，357399 and 684567.Specificity:when the control serum was determined，the measure vlalue was within the standard deviation （SD），95%-105%.Precision:N=60 CV≤5%.Conclusion Chemiluminescence is a reliable，stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity，precision and specificity.

【Key words】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質(zhì)激素，這是由胰島中的β細(xì)胞所合成、儲(chǔ)存和分泌的。IRI的功能是調(diào)節(jié)血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細(xì)胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個(gè)氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRI A鏈?zhǔn)怯?1個(gè)氨基酸組成，B鏈?zhǔn)怯?0個(gè)氨基酸組成；而C-肽是由31個(gè)氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產(chǎn)生應(yīng)答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規(guī)診斷方法，但是IRI水平的檢測(cè)對(duì)于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細(xì)胞分泌功能異?；颊叩囊饬x非常大［2，3］。

1 材料與方法

1.1 原理

IRI的測(cè)定是一種直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和雙抗體兩點(diǎn)夾心免疫分析法相結(jié)合的測(cè)定方法。第一種抗體稱為標(biāo)識(shí)抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標(biāo)記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價(jià)鍵的方式與順磁性顆粒相結(jié)合形成的。血清中的胰島素與相應(yīng)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生光量子，其光量子數(shù)的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2 儀器與試劑 儀器：BAER ACS-180型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標(biāo)準(zhǔn)液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3 方法 取血清于樣品杯中，置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，調(diào)整好檢測(cè)參數(shù)：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對(duì)反應(yīng)杯進(jìn)行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)發(fā)光，讀取光量子數(shù)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出結(jié)果。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 采用兩點(diǎn)定標(biāo)法，將標(biāo)準(zhǔn)血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標(biāo)位置上，編入測(cè)定程序，上機(jī)測(cè)定自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果

2.1 精密度 取混合血清分成兩份，一份當(dāng)天測(cè)定60次，結(jié)果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為1.8%；另一份做批間試驗(yàn)，測(cè)定10次，測(cè)定統(tǒng)計(jì)值為21±1.2mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為2.8%。

2.2 靈敏度 0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。IRI測(cè)定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3 回收試驗(yàn) 在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進(jìn)行回收試驗(yàn)，分別測(cè)得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4 線性分析 對(duì)一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測(cè)定體系光量子數(shù)的變化量，即為IRI與光量子數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：IRI在本法的測(cè)定范圍是0～335.0mIU/L。當(dāng)IRI大于335.0mIU/L時(shí)，開始偏離線性。因此對(duì)濃度高的標(biāo)本必須先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，然后測(cè)定。

2.5 干擾試驗(yàn) 當(dāng)溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時(shí)，對(duì)結(jié)果干擾甚微。

2.6 正常參考值 取100份經(jīng)我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測(cè)結(jié)果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無顯著性（P>0.05）。

3 討論

目前定量測(cè)定IRI的方法不多，過去一般用放射免疫法，該法測(cè)定步驟繁瑣，為半自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間長達(dá)3天，測(cè)定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對(duì)操作人員造成身體傷害及對(duì)周圍環(huán)境形成污染?，F(xiàn)在基本已被化學(xué)發(fā)光免疫法所代替，該法測(cè)定步驟簡單，為全自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間短，全過程最短為半小時(shí)即可完成，而它使用的試劑安全無放射性，為一般化學(xué)試劑，對(duì)操作人員無傷害，對(duì)周圍環(huán)境污染甚微。不過它也有缺點(diǎn)：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標(biāo)周期短，一般為2周。在試劑的有效期內(nèi)和定標(biāo)周期內(nèi)，對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果非常準(zhǔn)確可靠。綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

參考文獻(xiàn)

1 康格非，巫向前.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)，第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001，256.

2 Chevenne D，Trivin F，Porquet D.Insulin assays and reference values.Diabetes Metab，1999，25（6）：459-476.

篇4

【關(guān)鍵詞】熒光偏振免疫(TDx)法;丙戊酸鈉;血藥濃度

Determination of concentration of sodium valproate(VPA)in Human blood serum by TDx

SUN Li-wei,YAN Hong-yue.XinXiang Central Hospital,HeNan 453000,China

【Abstract】 Objective To determine the concentration of of sodium valproate(VPA)in human blood serum.Methods Determined by TDx.Results The concentration of sodium valproate(VPA)was 58.7%in 50~100 μg/ml.Conclusion The method is accurate and rapid and suitable.

【Key words】TDx;sodium valproate(VPA);Concentration of blood serum

丙戊酸鈉對(duì)人的各型癲癇均有效。因個(gè)體差異大,熒光偏振免疫(TDx)法對(duì)臨床使用丙戊酸鈉患者血藥濃度進(jìn)行測(cè)定,以便指導(dǎo)合理用藥。

1 儀器與試劑

TdxFlx熒光偏振免疫分析儀(美國雅培公司);Anke KA-1000離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);丙戊酸鈉試劑盒(美國雅培公司2010-04-08,65525Q100);丙戊酸鈉定標(biāo)液(美國雅培公司2009-08-08,57126Q100)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品預(yù)處理 患者血樣于離心機(jī)離心10 min,轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/min,吸取上層血清100 μl加入樣品孔中,鎖緊轉(zhuǎn)盤,放入儀器中,將冰箱中丙戊酸鈉試劑盒按順序?qū)⑸w子放入對(duì)應(yīng)的蓋槽內(nèi),關(guān)緊機(jī)門,按RUN鍵開始自動(dòng)檢測(cè)。

2.2 定標(biāo) 丙戊酸鈉定標(biāo)樣品處理操作步驟同2.1。結(jié)果見表1。

表1

標(biāo)準(zhǔn)曲線(STANDARD CAL 6點(diǎn)定標(biāo))

IDCONC(μg/ml)AVGPFITPPERR

A0.00279.63279.630.00

B12.50236.90234.522.38

C25.00202.52205.43-2.91

D50.00170.52170.410.11

E100.00139.72136.912.81

F150.00118.69120.73-2.04

注:RMSE=1.81

2.3 回收率 將濃度為100 μg/ml 的丙戊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液200 μl加入到1 ml的人全血中,然后按照2.1項(xiàng)下方法測(cè)定回收率,測(cè)得回收率97.5%。

2.4 精密度 用已知濃度的血清樣本,連續(xù)測(cè)定6次,計(jì)算得RSD=1.9%。

2.5 測(cè)定結(jié)果 本文所測(cè)定為2010年第二季度共67個(gè)受試對(duì)象,均服用丙戊酸鈉片,50~100μg/ml范圍內(nèi)占58,7%,有41.3%的患者達(dá)不到或超出安全治療范圍。

3 討論

丙戊酸鈉有使用氣相色譜法及高效液相色譜法對(duì)其測(cè)定[1,2],檢測(cè)條件要求較高,耗時(shí)長。再者通過監(jiān)測(cè)分析,臨床醫(yī)生很難根據(jù)經(jīng)驗(yàn)達(dá)到較大程度的滿意的臨床治療效果,熒光偏振免疫(TDx)法簡便、快速,適用于臨床常規(guī)檢查。

參考文獻(xiàn)

篇5

Abstract： Facing the era of informatization and reclamation， medical libraries should transform into a think tank providing knowledge service as the center. In this article， the orientation of building such think tank （medical library system） was studied based on the analysis on the nature of knowledge service and the development condition of think tank， that is， resource orientation principle with the knowledge service as the connotation， service orientation principle combined with the characteristics of medical libraries， think tank mechanism orientation principle with the integration of research and study， with a purpose to promote the soft power of medical libraries， and remain competitiveness to meet the needs of the era.

Key words： knowledge service； medical libraries； think tank； system； orientation

?S著互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的普及，知識(shí)信息逐漸向數(shù)字化形式轉(zhuǎn)化，智庫體系的融合加速了醫(yī)學(xué)圖書館的轉(zhuǎn)型。面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫體系定位，應(yīng)遵從以知識(shí)服務(wù)為內(nèi)涵的資源定位原則、結(jié)合醫(yī)學(xué)圖書館特色的服務(wù)定位原則、學(xué)研兼顧的智庫機(jī)制定位原則。從智庫與醫(yī)學(xué)圖書館的融合設(shè)計(jì)到整體體系的構(gòu)建，對(duì)其體系的定位研究至關(guān)重要。

1 知識(shí)服務(wù)與圖書館智庫

1.1 知識(shí)服務(wù)內(nèi)涵及意義

所謂知識(shí)服務(wù)，是指隨著知識(shí)管理概念的普及和信息服務(wù)領(lǐng)域的發(fā)展，針對(duì)用戶對(duì)知識(shí)獲取和利用的需求，對(duì)信息資源進(jìn)行分析、整合、重組和創(chuàng)新的過程。知識(shí)服務(wù)的內(nèi)涵十分廣泛，一方面體現(xiàn)

作者簡介：左紅，館員，研究方向?yàn)獒t(yī)院圖書館建設(shè)。 E-mail： lnws123@yeah.net

在信息資源的直接提供，以及挖掘大量的隱性知識(shí)；另一方面表現(xiàn)在顯性知識(shí)與隱性知識(shí)相互作用與相互轉(zhuǎn)化，以及通過建立“資源數(shù)據(jù)庫”和知識(shí)網(wǎng)絡(luò)，提供高效的知識(shí)服務(wù)保障。知識(shí)服務(wù)是在知識(shí)管理與信息服務(wù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，即針對(duì)用戶需求提供具體解決問題的方案，采用目標(biāo)驅(qū)動(dòng)服務(wù)、個(gè)性化服務(wù)最大程度上滿足用戶的訴求，促進(jìn)圖書館服務(wù)向多元化方向轉(zhuǎn)變。

1.2 圖書館智庫

智庫型服務(wù)起源于美國。所謂智庫，是指思想庫、腦庫、智囊團(tuán)，最早是幫助決策者出謀劃策，提供最佳理論策略和思想方法以處理社會(huì)經(jīng)濟(jì)等方面的問題[1]。智庫的參與決策特性決定了它越來越受到圖書館的重視。圖書館集合了大量的信息資源和行業(yè)專家，為智庫的發(fā)展搭建了天然的優(yōu)勢(shì)平臺(tái)。我國智庫一般分為政府性質(zhì)的官方智庫、民間發(fā)起的研究型智庫機(jī)構(gòu)和設(shè)立在大學(xué)內(nèi)部的研究智庫中心，本文著重討論醫(yī)學(xué)圖書館智庫。

基于知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫體系，是指醫(yī)學(xué)圖書館應(yīng)用知識(shí)管理的理論、技術(shù)與方法，合理配置和使用知識(shí)資源和人力資源，充分滿足用戶不斷變化的信息與知識(shí)需求的整體系統(tǒng)。

2 面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫定位原則

面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫的定位原則包括資源、服務(wù)和機(jī)制3個(gè)維度。

2.1 以知識(shí)服務(wù)為內(nèi)涵的資源定位原則

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的資源定位為滿足醫(yī)學(xué)專業(yè)知識(shí)的需要，建設(shè)面向公共衛(wèi)生、醫(yī)學(xué)知識(shí)、醫(yī)療醫(yī)護(hù)、醫(yī)學(xué)教育及日常健康知識(shí)的信息資源庫。在資源建設(shè)過程中，對(duì)各類資源庫進(jìn)行高水平結(jié)構(gòu)化與集中化的建設(shè)，最大程度滿足醫(yī)學(xué)圖書館的知識(shí)需求 [2]。此外，醫(yī)學(xué)圖書館智庫還要廣泛吸納學(xué)界尖端研究成果，積極與國內(nèi)外相關(guān)組織展開互惠互利合作。醫(yī)學(xué)圖書館智庫系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)知識(shí)經(jīng)過系統(tǒng)采集與轉(zhuǎn)化、加工與存儲(chǔ)，通過服務(wù)模塊傳遞給用戶，以便于用戶有的放矢，快捷高效地解決難題。

2.2 結(jié)合醫(yī)學(xué)圖書館特色的服務(wù)定位原則

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的服務(wù)往往貫穿于科研學(xué)習(xí)的整個(gè)過程，結(jié)合當(dāng)前互聯(lián)網(wǎng)、知識(shí)服務(wù)與信息技術(shù)的發(fā)展，醫(yī)學(xué)圖書館要提供高效的網(wǎng)絡(luò)化、數(shù)字化信息服務(wù)，以區(qū)別于傳統(tǒng)的服務(wù)。醫(yī)學(xué)知識(shí)的復(fù)雜性也要求醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)內(nèi)容應(yīng)具有知識(shí)性與多樣化的特色定位。醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)方式要具有主動(dòng)化與個(gè)性化，有針對(duì)性地幫助與指導(dǎo)用戶。

2.3 學(xué)研兼顧的智庫機(jī)制定位原則

機(jī)制定位主要指其組織構(gòu)建不同于傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)圖書館，應(yīng)加強(qiáng)圖書館智庫的管理，采取扁平化的組織結(jié)構(gòu)，有效減少管理層次，提高醫(yī)學(xué)圖書館智庫的運(yùn)行效率。廣納醫(yī)學(xué)方面不同的專業(yè)人才，完善醫(yī)學(xué)圖書館智庫的構(gòu)成，組建學(xué)研兼顧的圖書館智庫體系。

3 面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫資源定位

隨著當(dāng)前社會(huì)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，用戶對(duì)醫(yī)學(xué)圖書館智庫信息服務(wù)提出了更高要求。面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫的資源定位應(yīng)包括知識(shí)服務(wù)，完善文獻(xiàn)資源供應(yīng)鏈；知識(shí)創(chuàng)新，充實(shí)數(shù)據(jù)庫資源；知識(shí)管理，整合與提升知識(shí)信息3個(gè)方面。

3.1 知識(shí)服務(wù)，完善文獻(xiàn)資源供應(yīng)鏈

醫(yī)學(xué)圖書館智庫文獻(xiàn)供應(yīng)商的供應(yīng)體系是影響資源采購、資源儲(chǔ)備數(shù)量與質(zhì)量的關(guān)鍵因素。醫(yī)學(xué)圖書館智庫需明確信息定位，在選擇供應(yīng)商方面，要認(rèn)真審查，確保醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)資源供應(yīng)鏈的完整性[3]。形成以醫(yī)學(xué)知識(shí)資源為核心的特色供應(yīng)鏈，是構(gòu)建完善的醫(yī)學(xué)圖書館智庫、滿足用戶需求智庫體系的第一環(huán)節(jié)。醫(yī)學(xué)圖書館智庫的文獻(xiàn)供應(yīng)鏈中，可分為中文文獻(xiàn)和外文文獻(xiàn)兩大類，又分別包括期刊、圖書、電子資源。用戶通過團(tuán)購或單獨(dú)訂購的方式可獲取智庫提供的收費(fèi)文獻(xiàn)。此外，醫(yī)學(xué)圖書館智庫的免費(fèi)資源可公開為用戶提供閱覽或下載服務(wù)。這樣，用戶通過付費(fèi)或免費(fèi)的方式，可以獲取醫(yī)學(xué)圖書館智庫中有關(guān)醫(yī)學(xué)知識(shí)、醫(yī)療醫(yī)護(hù)、醫(yī)學(xué)教育的知識(shí)內(nèi)容。完善文獻(xiàn)資源供應(yīng)鏈，有利于保證醫(yī)學(xué)圖書館智庫的文獻(xiàn)質(zhì)量，方便圖書館文獻(xiàn)的管理，有助于為用戶提供更全面權(quán)威的知識(shí)信息。

3.2 知識(shí)創(chuàng)新，充實(shí)數(shù)據(jù)庫資源

數(shù)據(jù)庫是醫(yī)學(xué)圖書館實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化和數(shù)字化的基礎(chǔ)，需要不斷開發(fā)和補(bǔ)充。圖書館要利用技術(shù)對(duì)已存文獻(xiàn)資源進(jìn)行規(guī)范管理，使其能夠與互聯(lián)網(wǎng)接軌。同時(shí)，還應(yīng)進(jìn)一步開發(fā)各種醫(yī)學(xué)專題數(shù)據(jù)庫，發(fā)揮醫(yī)學(xué)圖書館的特色優(yōu)勢(shì)。例如中國醫(yī)院圖書館（http：//mlpla.org.cn），近年來加大了數(shù)字電子文獻(xiàn)資源的采購力度，購買了諸如SDOS（ScienceDirectOnSite，荷蘭Elsevier公司提供的電子期刊全文數(shù)據(jù)庫）、EMBASE（荷蘭醫(yī)學(xué)文摘數(shù)據(jù)庫）、美國Medline醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫、美國Web of Science數(shù)據(jù)庫、中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫（CNKI）等中外文數(shù)據(jù)庫多達(dá)40余種，還專門設(shè)置了數(shù)據(jù)庫研究開發(fā)部門，在國內(nèi)同行業(yè)中率先開展醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫的研發(fā)，自主研制了《中文生物醫(yī)學(xué)期刊數(shù)據(jù)庫》（CMCC）、《中國醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文數(shù)據(jù)庫》（CMAC）、《中文生物醫(yī)學(xué)期刊引文數(shù)據(jù)庫》（CMCI）、《解放軍醫(yī)學(xué)圖書館館藏生物醫(yī)學(xué)外文期刊文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫》（EMCC）、《藥物使用指南》等一系列醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息數(shù)據(jù)庫，加強(qiáng)了醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)資源的儲(chǔ)備，豐富了該?^的數(shù)據(jù)庫資源，構(gòu)建了獨(dú)具特色的醫(yī)學(xué)類文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫，創(chuàng)造了國內(nèi)領(lǐng)先的醫(yī)學(xué)圖書館智庫。

3.3 知識(shí)管理，整合與提升知識(shí)信息

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的作用在于對(duì)不同渠道、不同類型的信息文獻(xiàn)進(jìn)行有序化和整合化的分析處理，以一種更加完整和直觀的形態(tài)呈現(xiàn)于用戶面前，最快地幫助用戶解決問題，最大程度上增強(qiáng)信息資源的活性與利用價(jià)值。因此，面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫應(yīng)加強(qiáng)分析資源、整合資源、提升信息價(jià)值的能力，以實(shí)現(xiàn)文獻(xiàn)資源的流通與增值。

4 面向知識(shí)服務(wù)醫(yī)學(xué)圖書館智庫的服務(wù)定位

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的知識(shí)取向決定了其服務(wù)定位，圖書館應(yīng)以知識(shí)為導(dǎo)向、發(fā)展特色館藏文獻(xiàn)，以用戶需求為基礎(chǔ)、采用靈活服務(wù)方式，以實(shí)際服務(wù)效果為標(biāo)準(zhǔn)，及時(shí)征求用戶意見，獲取反饋信息。

4.1 以知識(shí)為導(dǎo)向，發(fā)展特色館藏文獻(xiàn)

面向知識(shí)服務(wù)醫(yī)學(xué)圖書館智庫開展社會(huì)化、網(wǎng)絡(luò)化服務(wù)，旨在為用戶提供有效的信息資源檢索。在實(shí)現(xiàn)智庫體系時(shí)，首先應(yīng)根據(jù)本館的實(shí)際情況，構(gòu)建符合本館特色的館藏文獻(xiàn)服務(wù)系統(tǒng)。不同高校、不同企業(yè)因信息服務(wù)的需求不盡相同，在發(fā)展過程中會(huì)有其側(cè)重點(diǎn)。醫(yī)學(xué)知識(shí)庫是信息資源的儲(chǔ)存，包含了顯性知識(shí)和隱性知識(shí)的內(nèi)容。以中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫（CBM）為例，它匯集了大量的生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息，同時(shí)也對(duì)信息源進(jìn)行了拓展延伸。類似CBM的知識(shí)庫還有COCHRANCE協(xié)作網(wǎng)、美國Medline醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫、美國國家生物技術(shù)信息中心（NCBI）等。因此，醫(yī)學(xué)圖書館智庫應(yīng)在技術(shù)條件允許的情況下，兼顧外部知識(shí)庫與內(nèi)部知識(shí)庫，建立包含顯性知識(shí)與隱性知識(shí)的醫(yī)學(xué)特色館藏[4]，使之達(dá)到知識(shí)系統(tǒng)性、檢索便利性的目的。

4.2 以用戶需求為基礎(chǔ)，采用靈活服務(wù)方式

所謂以用戶需求為基礎(chǔ)，是指醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)應(yīng)該根據(jù)用戶對(duì)信息需求的特點(diǎn)，結(jié)合互聯(lián)網(wǎng)信息技術(shù)，為用戶提供定制化的個(gè)，真正做到以用戶為中心，全心全意為用戶考慮，以滿足用戶要求作為終極服務(wù)目標(biāo)。醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)方式應(yīng)在網(wǎng)絡(luò)化和遠(yuǎn)程化的服務(wù)體系中加以融合發(fā)展，以更加多元化和人性化的服務(wù)理念，開展網(wǎng)絡(luò)讀者服務(wù)、網(wǎng)絡(luò)醫(yī)學(xué)知識(shí)檢索服務(wù)、網(wǎng)絡(luò)醫(yī)學(xué)知識(shí)咨詢服務(wù)、個(gè)性化信息推送服務(wù)、個(gè)性化信息定制服務(wù)及遠(yuǎn)程指導(dǎo)服務(wù)等多種形式的服務(wù)內(nèi)容[5]。

4.3 以實(shí)際效果為依據(jù)，及時(shí)獲取反饋信息

醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)體系的設(shè)計(jì)與規(guī)劃最終是否呈現(xiàn)出應(yīng)有的效果，還需在實(shí)踐過程中對(duì)用戶的反饋信息進(jìn)行搜集與分析，用戶的滿意度是衡量服務(wù)體系合理與否的關(guān)鍵因素。因此，醫(yī)學(xué)院圖書館智庫服務(wù)定位必須以實(shí)際效果為依據(jù)，通過認(rèn)真調(diào)研分析用戶在智庫資源信息服務(wù)領(lǐng)域里的真實(shí)需求以及接受服務(wù)的滿意度，進(jìn)行總結(jié)和反思，進(jìn)而指導(dǎo)下一階段工作的改進(jìn)與完善。具體操作流程可以簡述為，醫(yī)學(xué)圖書館首先將醫(yī)學(xué)知識(shí)進(jìn)行采集轉(zhuǎn)化與加工儲(chǔ)存，然后通過檢索、借閱等服務(wù)提供給用戶所需的信息資源，幫助用戶解決實(shí)際問題，最后設(shè)置用戶反饋環(huán)節(jié)。用戶對(duì)醫(yī)學(xué)圖書館智庫體驗(yàn)之后將意見或建議反饋給圖書館館員，館員將集中的問題進(jìn)行統(tǒng)一處理或者生成新的服務(wù)，再次參與到信息服務(wù)的體系當(dāng)中。由此形成一個(gè)開放式、循環(huán)式的醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)體系。由此可見，反饋信息機(jī)制在醫(yī)學(xué)圖書館智庫服務(wù)體系當(dāng)中起著促進(jìn)工作、改善系統(tǒng)的作用，是下一階段工作調(diào)整的重要依據(jù)。

5 面向知識(shí)服務(wù)醫(yī)學(xué)圖書館智庫的機(jī)制定位

基于知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫要按照知識(shí)服務(wù)的要求，全面建設(shè)用戶需求機(jī)制，以便符合知識(shí)服務(wù)的導(dǎo)向原則。還要廣納高水平的館員，注重創(chuàng)新性團(tuán)隊(duì)的建設(shè)，組建科學(xué)的知識(shí)管理機(jī)制。要兼顧“學(xué)”與“研”，打造多重發(fā)展的醫(yī)學(xué)圖書館智庫機(jī)制。

5.1 從知識(shí)服務(wù)角度出發(fā)，分析用戶需求

“知識(shí)服務(wù)、用戶需求”并非一句口號(hào)，醫(yī)學(xué)圖書館智庫要將分析用戶作為一個(gè)機(jī)制進(jìn)行構(gòu)建。例如，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院圖書館（http：//lib.shsmu.edu.cn）十分重視用戶分析機(jī)制，該圖書館定期分析目標(biāo)讀者的相關(guān)信息，包括近期的檢索情況、借閱習(xí)慣和需求方向，掌握讀者、用戶的大致取向，為其提供特定的個(gè)性化服務(wù)，定期定時(shí)將用戶有可能感興趣的資源信息進(jìn)行推送，真正實(shí)現(xiàn)“急人之所急”的服務(wù)理念。此外，分析用戶需求機(jī)制還為醫(yī)學(xué)圖書館智庫的發(fā)展點(diǎn)亮了方向。醫(yī)學(xué)圖書館的信息服務(wù)對(duì)象不僅包含了醫(yī)療工作者，如醫(yī)院管理人員、臨床醫(yī)生護(hù)士、衛(wèi)生部門人員，還包括了醫(yī)學(xué)研究人員和技術(shù)人員等，通過分析各行業(yè)用戶需求機(jī)制，可以有效地對(duì)不同需求者進(jìn)行知識(shí)信息定制，幫助他們解決實(shí)際問題。而不同領(lǐng)域不同專業(yè)的用戶也會(huì)站在不同的角度為醫(yī)學(xué)圖書館提出不同層面的意見及切實(shí)可行的改進(jìn)建議。如上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院圖書館通過人機(jī)交互界面，積極對(duì)用戶訪問圖書館資源的詳細(xì)情況進(jìn)行搜集與分析，將不同人群感興趣的信息資源分類存放，簡化檢索程序，縮短了資源信息獲取的時(shí)間，切實(shí)做到了從知識(shí)服務(wù)和用戶需求的角度出發(fā)，構(gòu)建了面向知識(shí)服務(wù)的醫(yī)學(xué)圖書館智庫的個(gè)性化服務(wù)機(jī)制。

5.2 ?鬧強(qiáng)夥⒄菇嵌瓤悸牽?組建科學(xué)知識(shí)管理機(jī)制

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的管理機(jī)制，集中體現(xiàn)在對(duì)知識(shí)資源的管理。依據(jù)知識(shí)服務(wù)的理論，知識(shí)管理可以分為采集與加工、存儲(chǔ)與積累、傳播與共享、使用與創(chuàng)新4個(gè)環(huán)節(jié)，每個(gè)環(huán)節(jié)按順序有條不紊地進(jìn)行，即為科學(xué)的知識(shí)管理機(jī)制。結(jié)合醫(yī)學(xué)圖書館智庫特點(diǎn)，具體表現(xiàn)為醫(yī)學(xué)知識(shí)的采集、轉(zhuǎn)化、加工、存儲(chǔ)、服務(wù)鏈性發(fā)展順序。醫(yī)學(xué)知識(shí)的采集是智庫構(gòu)建的起點(diǎn)，也是醫(yī)學(xué)知識(shí)得以利用的第一步，直接關(guān)系到醫(yī)學(xué)圖書館智庫的質(zhì)量；醫(yī)學(xué)知識(shí)的轉(zhuǎn)化是指將雜亂無章的知識(shí)信息劃分為顯性知識(shí)和隱性知識(shí)兩大類；醫(yī)學(xué)知識(shí)的加工是按照不同的要求和一定的方法程序，將獲取的零散的、無序的資源信息進(jìn)行分類、鑒別、篩選、剔除和整理，使得醫(yī)學(xué)圖書館智庫中的資源信息條理化、準(zhǔn)確化、規(guī)范化，使醫(yī)學(xué)知識(shí)內(nèi)容具有使用價(jià)值，便于下一步的儲(chǔ)存與利用；醫(yī)學(xué)知識(shí)的存儲(chǔ)功能是指將醫(yī)學(xué)知識(shí)進(jìn)行科學(xué)有序的存放、保管，方便用戶的檢索和閱覽；醫(yī)學(xué)知識(shí)的服務(wù)即知識(shí)管理機(jī)制的最后一步，是將醫(yī)學(xué)知識(shí)傳遞給用戶，使其得到使用。

5.3 從學(xué)研兼顧角度構(gòu)建，吸收高素質(zhì)人才

醫(yī)學(xué)圖書館智庫的機(jī)制定位在于多學(xué)科的交叉和多維度的決策。因此，圖書館智庫構(gòu)建不僅要對(duì)日常學(xué)習(xí)起到輔助作用，還要外延至科研領(lǐng)域。例如，遵義醫(yī)學(xué)院圖書館智庫（http：//lib.zmc.edu.cn/ tsgcms/index.php），遵循邊建設(shè)邊培養(yǎng)的機(jī)制定位，在專業(yè)醫(yī)學(xué)知識(shí)學(xué)科信息資源和咨詢服務(wù)復(fù)合效應(yīng)下，構(gòu)建了圖書館服務(wù)能力共生機(jī)制和高素質(zhì)人員培養(yǎng)模型。遵義醫(yī)學(xué)院圖書館設(shè)立了研究骨干創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，兼顧“學(xué)”與“研”，既考慮眼前目標(biāo)，又注重長遠(yuǎn)發(fā)展，廣泛吸收高素質(zhì)人才，豐富圖書館科研團(tuán)隊(duì)。此外，醫(yī)學(xué)圖書館內(nèi)還應(yīng)定期開展業(yè)務(wù)培訓(xùn)，對(duì)前沿的醫(yī)學(xué)動(dòng)態(tài)進(jìn)行了解和分析，定期將醫(yī)學(xué)研究項(xiàng)目進(jìn)行匯報(bào)、交流討論，不斷提升圖書館管理者的業(yè)務(wù)技能。

篇6

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.742 文章編號(hào)：1004-7484（2013）-08-4723-02

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是臨床上免疫學(xué)檢驗(yàn)的最常用方法之一，用于測(cè)定各種血清免疫學(xué)標(biāo)志物如乙肝血清標(biāo)志物（俗稱乙肝“兩對(duì)半”）、HCV抗體、HIV抗體、梅毒抗體等。ELISA法測(cè)定的基本原理如下：把受檢標(biāo)本（待測(cè)抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體與固相載體（如聚苯乙烯塑料微孔）表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例關(guān)系。加入酶作用的底物后，底物被轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。由于酶催化效率極高，因此ELISA法敏感度很高。ELISA法操作簡便，在我國各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)得到了推廣應(yīng)用，但是標(biāo)本本身和檢測(cè)全過程存在諸多影響因素，可造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)一定的假陽性和假陰性導(dǎo)致臨床上出現(xiàn)誤診漏診。本文對(duì)ELISA法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的常見影響因素進(jìn)行分析。

1 患者因素

患者由于疾病原因體內(nèi)存在高濃度的類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、甲胎蛋白、嗜異性抗體等，可與固相抗體Fc段結(jié)合而可干擾測(cè)定，導(dǎo)致乙肝表面抗原和乙肝e抗原假陽性[1]。

2 標(biāo)本因素

標(biāo)本嚴(yán)重溶血可影響ELISA法測(cè)定。因?yàn)檠t蛋白分子中的亞鐵血紅素具有類似過氧化物酶活性，可結(jié)合在固相載體上，若洗板過程未完全洗掉，最后可催化過氧化物酶底物（四甲基聯(lián)苯胺）顯色，可導(dǎo)致HBsAg和HBeAg測(cè)定結(jié)果呈假陽性。

細(xì)菌污染的血清標(biāo)本可影響ELISA法檢測(cè)。有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著細(xì)菌數(shù)的增加，S/CO.變化增大[3]。其可能的機(jī)理為：有些細(xì)菌可產(chǎn)生大量菌體內(nèi)源性辣根過氧化物酶活性的物質(zhì)，催化底物顯色而干擾檢測(cè)結(jié)果。

標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間也是ELISA法的重要影響因素。若標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間過長，則抗原或抗體免疫活性下降也可影響檢測(cè)結(jié)果。因此，標(biāo)本若不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)及時(shí)分離血清放在低溫下保存。4℃下一般可保存5天，若1周后檢測(cè)則應(yīng)在-20℃冷凍保存。

血清中的纖維蛋白導(dǎo)致假陽性結(jié)果，故新鮮采集的血液標(biāo)本應(yīng)該等待血液自然凝固后再離心分離出血清。

HBsAg或HBeAg濃度也可影響ELISA法的檢測(cè)結(jié)果。若標(biāo)本中兩者或其中之一濃度過高，可使一步法ELISA（即血清標(biāo)本和酶結(jié)合物同時(shí)加入反應(yīng)微孔板）檢測(cè)結(jié)果假陰性，這是由于“鉤狀效應(yīng)”造成假陰性或使強(qiáng)陽性變?yōu)槿蹶栃?。解決策略有兩種：

2.1 改用兩步法ELISA（即血清標(biāo)本和酶結(jié)合物分兩步加入）試劑進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 若只有一步法ELISA試劑，則須對(duì)血清做一定的稀釋后再加入反應(yīng)微孔內(nèi)。

3 試劑因素

ELISA法試劑的質(zhì)量是決定檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵性因素。這些因素包括抗原或抗體純度、抗體親和力、包被在固相載體上的抗原或抗體的量和穩(wěn)定性、抗體特異性、重復(fù)性等。中和抗原的濃度也可影響檢驗(yàn)結(jié)果，一般其濃度過高，假陰性增多。標(biāo)記抗體或抗原所用酶（如辣根過氧化物酶）的比活性可影響酶的催化活性，從而間接降低了乙肝兩對(duì)半檢測(cè)的靈敏度。從而使低濃度的HBsAg感染者漏檢。終止液（通常為硫酸）濃度也可影響最終結(jié)果的判讀，若硫酸濃度不夠高，則高濃度的樣本加入終止液后呈黃色很快又變?yōu)辄S綠色，而導(dǎo)致比色結(jié)果S/CO.下降。

4 操作技術(shù)因素

4.1 加樣 加樣時(shí)將樣品加在微孔板的孔壁上，可導(dǎo)致HBsAg和HBeAg的S/CO.值降低甚至假陰性。此外，加樣時(shí)若吸到纖維蛋白凝塊，可導(dǎo)致HBsAg和HBeAg假陽性。

4.2 加酶 若因?yàn)椴恍⌒牟僮鞫嗉尤?滴（50μL）酶結(jié)合物或?qū)⒔Y(jié)合物加在孔壁或孔間隙，則可使顯色過深，影響乙肝兩對(duì)半的判讀。

4.3 孵育 不同的孵育方法也可影響檢測(cè)結(jié)果。一般來說，水浴法較孵箱法更穩(wěn)定，故邊緣效應(yīng)更小。孵育時(shí)間的長短會(huì)也可影響結(jié)果，孵育時(shí)間過長或過短可使夾心法如HBsAg、HBsAb和HBeAg測(cè)定結(jié)果偏高或偏低。孵育溫度可通過影響酶促反應(yīng)和抗原抗體反應(yīng)而影響測(cè)定結(jié)果，溫度過高，容易使酶變性失活；溫度過低，反應(yīng)很慢，同樣影響酶催化效率。故孵育溫度一般選擇37℃為宜。

4.4 洗板 若洗板過程浸泡時(shí)間過長或洗板次數(shù)過多，則可使HBsAg、HBsAb和HBeAg等夾心法檢測(cè)結(jié)果由強(qiáng)陽性變?yōu)槿蹶栃裕踔良訇幮?。同時(shí)，可使競爭法測(cè)HBeAb、HBcAb呈假陽性。洗板次數(shù)不夠或浸泡時(shí)間過短，又會(huì)導(dǎo)致“花板現(xiàn)象”，影響結(jié)果判讀。洗板后盡量拍干排出微孔內(nèi)液體，孔內(nèi)殘留液一般不超過2μl。

4.5 加底物 底物的加入量也可影響ELISA法測(cè)定結(jié)果。底物加入量過多會(huì)影響顯色深淺。若漏加A、B底物中任何一種，則不會(huì)出現(xiàn)顯色反應(yīng)，造成結(jié)果判讀錯(cuò)誤。

4.6 結(jié)果判讀方法和時(shí)間 加入終止液后應(yīng)盡快用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色，雙波長法優(yōu)于單波長比色法。加入終止液30min以后，夾心法檢測(cè)項(xiàng)目HBsAg、HBsAb和HBeAg容易由弱陽性變?yōu)殛幮裕偁幏z測(cè)項(xiàng)目HBeAb、HBcAb則由陰性變?yōu)槿蹶栃曰蜿栃浴?/p>

綜上所述，我們?cè)谝腋蝺蓪?duì)半檢測(cè)過程中，每批次檢測(cè)應(yīng)做好室內(nèi)質(zhì)量控制，同時(shí)檢測(cè)全過程注意操作的規(guī)范性，把握檢測(cè)過程的影響因素，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性。

參考文獻(xiàn)

[1] 王昕.ELISA法檢測(cè)HBsAg的影響因素分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2001，6（3）：43.

篇7

[關(guān)鍵詞] 電化學(xué)發(fā)光法；放射免疫法；甲狀腺激素

[中圖分類號(hào)] R446.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）03-0071-02

Comparing of measurement of thyroid hormones by ECLIA and RIA

ZHANG Yuping

Deparment of Clinical Laboratory, the Affiliated Hospital of Xinyang Vocational and Technical College, Xinyang 464000, China

[Abstract] Objective To compare which one is superiority in result of reliability and methodology of convenience between ECLIA and RIA measurement. Methods The thyroid hormones were measured by ECLIA and RIA. The measurements were compared of precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range and others. Results Precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range of ECLIA have had an advantage over RIA. Conclusion ECLIA is an outstanding method applied in clinical laboratory.

[Key words] ECLI; RIA; Thyroid hormones

放射免疫法（RIA）檢測(cè)成本低，但具有報(bào)告時(shí)間長、結(jié)果不穩(wěn)定、同位素污染等缺點(diǎn)，漸趨于淘汰。近年來隨著檢測(cè)分析技術(shù)的發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光（ECLI）分析法日益受到關(guān)注，本文分別采用2種方法對(duì)甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和20份患者血清甲狀腺激素進(jìn)行測(cè)定并對(duì)其評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

20份血清標(biāo)本取自門診患者，均為甲狀腺疾病，血標(biāo)本無脂血和溶血。標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品均為羅氏公司提供。

1.2 儀器與試劑

電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為美國羅氏公司生產(chǎn)的2010型；美國產(chǎn)全自動(dòng)γ計(jì)數(shù)儀。電化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑購于羅氏公司，放射免疫分析試劑購于天津九鼎公司。

1.3 方法

1.3.1 精密度 用兩種方法分別對(duì)中、高值質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，每份樣品連測(cè)20次，計(jì)算批內(nèi)CV值。每日測(cè)定1次，連續(xù)20次，計(jì)算批間CV值。

1.3.2 線性范圍 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol/L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）及中、高值質(zhì)控品按不同比例關(guān)系混合制成評(píng)價(jià)樣品，重復(fù)測(cè)定5次。坐標(biāo)圖上預(yù)期值與實(shí)測(cè)值的直線所達(dá)的限值即為線性范圍。

1.3.3 靈敏度 分別對(duì)空白零標(biāo)準(zhǔn)做批內(nèi)20次檢測(cè)，分別記錄放射強(qiáng)度和發(fā)光強(qiáng)度并做統(tǒng)計(jì)，再計(jì)算檢測(cè)低限（LLD）[1]。公式：LLD=均值BIK+2SBLK。

1.3.4 回收實(shí)驗(yàn) 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol／L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）作為基質(zhì)，在其中分別加入中、高值質(zhì)控品作為樣品1和2 ，然后分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算均值并進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度

觀察兩種方法測(cè)定甲狀腺激素的批內(nèi)和批間CV結(jié)果可見，兩種方法均達(dá)到了臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量要求，但電化學(xué)發(fā)光法的精密度更高。見表1、2。

2.2 線性范圍

2種方法檢測(cè)FT3、FT4、TSH的可報(bào)告范圍：電化學(xué)發(fā)光免疫法（0.26～115） pmol/L、（0.12～116） pmol/L、（0.08～90）mIU/L。放射免疫法為（1.14～65）pmol/L、（1.69～82） pmol/L、（0.23～58）m/L。

2.3 靈敏度

兩種方法檢測(cè)FT3、FT4、TSH的低限，電化學(xué)發(fā)光免疫法為0.12pmol/L、0.16pmol/L、0.09mIU/L；放射免疫法為1.11pmol/L、1.77pmol/L、0.24mIU/L。

2.4 回收實(shí)驗(yàn)

檢測(cè)結(jié)果平均回收率見表。均有較好的回收率，比較后發(fā)現(xiàn)電化學(xué)發(fā)光免疫法優(yōu)于放射免疫法（P ＜ 0.05）。

3 討論

放射免疫分析始于20世紀(jì)60年代，其敏感度、特異性均較好，發(fā)生交叉反應(yīng)少，準(zhǔn)確性好、重復(fù)性好、批內(nèi)批間誤差低，但容易發(fā)生放射性污染，不能形成自動(dòng)化，不能快速地檢測(cè)、出報(bào)告[1]。電化學(xué)發(fā)光免疫法是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫技術(shù)，近年來在國內(nèi)一部分臨床實(shí)驗(yàn)室相繼應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光免疫法不僅可用于檢測(cè)激素類、腫瘤標(biāo)志物類，還可用于傳染病、血藥濃度的監(jiān)測(cè)，預(yù)計(jì)將來臨床應(yīng)用會(huì)更加廣泛。電化學(xué)發(fā)光免疫法自動(dòng)化強(qiáng)，可以24小時(shí)開機(jī)，能夠隨時(shí)滿足現(xiàn)代醫(yī)院的節(jié)奏和病人對(duì)醫(yī)院的更高要求，如一些急診項(xiàng)目；絨毛膜促性腺激素、肌紅蛋白、肌鈣蛋白等，隨時(shí)檢測(cè)，具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值[2]。

本組試驗(yàn)表明兩種方法檢測(cè)血清FT3、FT4、TSH的結(jié)果在精密度、線性范圍、靈敏度、回收率等幾方面均有顯著性差異，顯示電化學(xué)發(fā)光免疫法明顯優(yōu)于放射免疫法。電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)血清FT3、FT4、TSH時(shí)，被測(cè)抗原與抗體全部參與反應(yīng)；而放射免疫法是競爭性反應(yīng)，被測(cè)物和標(biāo)準(zhǔn)物都不能全部參與反應(yīng)，最大結(jié)合時(shí)一般在50%左右，亦即抗體結(jié)合位點(diǎn)與標(biāo)記抗原結(jié)合一半[3]。試驗(yàn)結(jié)果顯示了電化學(xué)發(fā)光免疫法在可測(cè)定范圍上要遠(yuǎn)勝于放射免疫法。

電化學(xué)發(fā)光可以最大程度消除樣本底的干擾及對(duì)位量的散射，可以獲得較高的靈敏度。另外電化學(xué)發(fā)光免疫法可以全自化，能夠最大限度減少系統(tǒng)和隨機(jī)誤差。而且電化學(xué)發(fā)光免疫法試劑有效期長，檢測(cè)快速準(zhǔn)確，且安全無毒，不會(huì)出現(xiàn)同位素輻射污染的問題[4]。

因此，電化學(xué)發(fā)光將會(huì)成為微量法檢測(cè)的發(fā)展和普及方向，可以替代放免法，使實(shí)驗(yàn)室的服務(wù)具有競爭力。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 馮琴，楊駿，朱菩軍. 電化學(xué)發(fā)光分析與酶聯(lián)免疫分析用于測(cè)定血清甲狀腺激素的評(píng)價(jià)[J]. 地方病通報(bào)，2007，22（6）：32-34.

[2] 王國洪，趙理想，許瑞吉，等. 放射免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析血清胰島素結(jié)果差異[J]. 放射免疫學(xué)雜志，2007，20（6）：557-558．

[3] 吳嬰. 放射免疫分析與電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清FT3、FT4結(jié)果分析[J]. 放射免疫學(xué)雜志，2010，23（1）：29-30.

篇8

【摘要】 目的 構(gòu)建細(xì)粒棘球蚴鐵蛋白基因的重組表達(dá)質(zhì)粒ferritin/pET-28a，表達(dá)、純化出重組蛋白，并對(duì)重組蛋白的免疫學(xué)特性進(jìn)行初步研究。方法 將目的基因亞克隆至表達(dá)載體pET-28a，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)plysS，加入IPTG對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過Ni2+的His-bind樹脂柱純化出重組蛋白，用50μg/100μL免疫ICR小鼠，獲得抗血清，通過western-blot及ELISA對(duì)重組鐵蛋白的免疫學(xué)特性進(jìn)行初步研究。結(jié)果 表達(dá)并純化出分子量約19kD重組鐵蛋白，western-blot顯示重組蛋白免疫制備的抗血清可識(shí)別純化的重組蛋白及抗原囊液、原頭蚴，位置大致相同，約19kD。ELISA結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠與對(duì)照組小鼠血清中IgG的OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 細(xì)粒棘球蚴重組鐵蛋白Eg.ferritin具有較好的抗原性及免疫原性，具有成為包蟲疫苗候選分子的潛能。

【關(guān)鍵詞】 細(xì)粒棘球蚴；重組鐵蛋白；純化；免疫特性

鐵蛋白(ferritin)是普遍存在于生物體內(nèi)的一種保守性較高的多功能多亞基蛋白，其作用是儲(chǔ)存鐵，對(duì)生物體內(nèi)鐵含量進(jìn)行調(diào)控，在生物體內(nèi)鐵含量過多時(shí)起到解毒作用［1-2］，它的存在保證了生命體的正常活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)中心已構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒ferritin/pGEX-6p-1，但由于重組蛋白ferritin/GST以包涵體形式存在于細(xì)胞中，無法通過親和層析柱純化出單一的Eg.ferritin［3］。只能通過切膠純化的方法獲得融合蛋白Ferritin/GST，雖然試驗(yàn)結(jié)果說明該融合蛋白具有較好的抗原性及免疫原性，但影響蛋白特性的因素較多，不能很好的反映蛋白的實(shí)際特性，因此本次試驗(yàn)將鐵蛋白基因重組到表達(dá)質(zhì)粒pET-28a中，pET-28a是個(gè)高效表達(dá)載體，能純化變性及非變性的蛋白，通過表達(dá)純化可獲得較純的Eg.ferritin，以便更好地研究蛋白的特性，為鐵蛋白能成為包蟲病候選疫苗提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)粒與菌種 Eg.ferritin/pGEM-T/JM109及E.coli BL21(DE3)plysS由本室保存；pET-28a表達(dá)載體購自Novagen公司。

1.2 試劑 T4連接酶、限制性內(nèi)切酶BamH I、Not I、IPTG、N'N'N'N-四甲基乙二胺、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺購自Promega公司；β-巰基乙醇、二甲基亞砜、弗氏完全(不完全)佐劑、過硫酸銨、Tween-20等試劑購自于SIGMA公司；考馬斯亮藍(lán)購自BIOMOL公司；酵母提取物、蛋白提取物購自O(shè)XOID公司；蛋白預(yù)染Marker購自北京賽百盛；卡那霉素、TMB、4-氯-1-奈酚購自AMRESCO；羊抗鼠HRP-IgG、質(zhì)粒DNA提取試劑盒等購自北京華美公司；DNA純化回收試劑盒購自北京賽百盛生物有限公司；標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量Marker 購自中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所；含Ni2+的His-bind樹脂純化試劑盒購自Novagen公司；其它常用試劑為國產(chǎn)分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠，6～8周，(18±2)g，雌性，由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4 Eg.ferritin/pET-28a重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定 取Eg.ferritin/pGEM-T/JM109菌株劃板接菌［4］，并挑單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)，通過堿裂解法提取重組質(zhì)粒；同時(shí)取適量的表達(dá)載體pET-28a，將兩者分別用BamH I，Not I進(jìn)行雙酶切處理，用1%的瓊脂糖凝膠電泳分離帶有雙黏性末端的目的片段和表達(dá)載體，切膠，經(jīng)DNA回收試劑盒純化目的片段及載體。目的片段與表達(dá)載體在T4連接酶的作用下，16℃連接過夜。繼而將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到已制備好的感受態(tài)菌BL21(DE3)plysS中［5］，經(jīng)含卡那霉素終濃度為50μg/mL的LB固體培養(yǎng)基篩選陽性菌株［6］。挑取陽性菌株含卡那霉素的LB培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，經(jīng)質(zhì)粒提取試劑盒純化重組質(zhì)粒，用限制性內(nèi)切酶BamH I，Not I進(jìn)行酶切鑒定。

1.5 重組鐵蛋白的表達(dá)、純化

1.5.1 重組蛋白的表達(dá) 將重組菌接種于含卡那霉素(終濃度為50μg/mL)的3mL 的LB培養(yǎng)基中，37℃ 200 r/min 振蕩培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，按1∶50接種于50mL培養(yǎng)基中，37℃，220 r/min，培養(yǎng)至OD600=0.5時(shí)，加入IPTG至終濃度為0.05mmol/L，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)6h，4℃ 4000r/min 離心15min，棄上清，收集細(xì)菌沉淀，SDS-PAGE觀察表達(dá)情況。

1.5.2 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定 將樣本與2×SDS-PAGE樣本緩沖液混合，經(jīng)12% SDS-PAGE，180V電壓，電泳至溴酚蘭指示劑到膠底為止，用0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色2h，用含7%冰醋酸5%甲醇的脫色液脫色至本底無色。

1.5.3 重組抗原的純化及制備 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，發(fā)現(xiàn)重組蛋白以包涵體的形式存在，按照Novagen公司His-bind樹脂純化試劑盒說明書中的包涵體大量純化方法進(jìn)行純化，然后將純化好的包涵體蛋白放入透析袋中，用1×PBS透析去除尿素。

1.6 動(dòng)物免疫及特異性抗血清的制備

1.6.1 動(dòng)物免疫 ICR小鼠分兩組，即免疫組與對(duì)照組，每組10只。1)免疫組每只注射弗氏佐劑與重組抗原Eg.ferritin的乳化劑50μg/100μL。對(duì)照組注射弗氏佐劑和PBS的乳化劑100μL。根據(jù)Bio-Rad公司的Gel Doc1000凝膠分析系統(tǒng)對(duì)純化的抗原進(jìn)行定量。2)免疫方法 每組小鼠在0、2、4周各免疫1次，共3次，第1次基礎(chǔ)免疫用弗氏完全佐劑，以后2次為加強(qiáng)免疫均用弗氏不完全佐劑。采用背部皮下多點(diǎn)注射免疫，每次注射量為100μL/只。分別于0、2、4、6周斷尾采血，共4次，8周眼眶取血并處死小鼠。

1.6.2 特異性抗血清的制備 將血液4000r/min 離心 10min，提取血清，-20℃保存。

1.7 血清特異性識(shí)別 純化的重組抗原Eg.ferritin、天然可溶性抗原囊液、原頭蚴通過10%分離膠及5%的濃縮膠，180V電壓下進(jìn)行SDS-PAGE電泳 1h。在30mA下對(duì)硝酸纖維膜進(jìn)行印跡轉(zhuǎn)移1h。然后將硝酸纖維膜浸入5%的脫脂奶粉溶液中，37℃ 封閉1h，以PBS-T(PBS中含0.5‰ Tween-20)溶液洗3次，每次5min。再將硝酸纖維膜剪開分別浸泡于1∶100稀釋的Eg.ferritin免疫的特異性小鼠抗血清及對(duì)照組鼠血清中，4℃ 過夜。次日將膜用PBS-T溶液洗3次，每次5min，然后與1∶1000稀釋的羊抗鼠IgG-辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合，37℃反應(yīng)1h。再以PBS-T溶液洗4次，每次10min。加入新配制的底物液(6mg 4-氯-1-奈酚，2mL冷甲醇，10mL的TBS，12μL的H2O2)37℃顯色5min，最后用蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。

1.8 抗血清中IgG的測(cè)定 采用ELISA法，用純化的Eg.ferritin 5μg/mL包被酶標(biāo)板100μL/孔，4℃過夜。次日，PBS-T洗3次，5％牛奶封閉100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗3次，取0～8周的免疫組及對(duì)照組小鼠血清作為一抗，按1∶100稀釋，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，羊抗鼠HRP-IgG為二抗，按1∶1000稀釋，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，加入顯色劑100μL/孔，待對(duì)照孔顯色時(shí)，加入2M H2SO4 50μL/孔 終止反應(yīng)。以包被抗原及進(jìn)行牛奶封閉的孔為空白調(diào)零，置酶標(biāo)儀450nm波長處測(cè)OD值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件，采用兩樣本t檢驗(yàn)的方法對(duì)測(cè)定的OD值進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 表達(dá)質(zhì)粒Eg.ferritin/pET-28a的酶切鑒定

將構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒Eg.ferritin/pET-28a 用限制性內(nèi)切酶BamH I和Not I 雙酶切后，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到插入片斷大小約560bp，與目的基因片段相符。M1.Lambda DNA/HindⅢMarker；1.pET-28a空質(zhì)粒；2.Eg·ferritin/

2.2 Eg.ferritin 的純化

含Ni2+的His-bind樹脂親合柱純化Eg.ferritin/pET-28a表達(dá)的蛋白，經(jīng)SDS-PAGE，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量可知，純化蛋白的分子量約19kD.

2.3 特異性抗血清識(shí)別純化蛋白和天然抗原

純化Eg.ferritin免疫小鼠制備的抗血清可特異性識(shí)別未純化的重組Eg.ferritin，純化的Eg.ferritin 及天然抗原(原頭蚴、囊液)，識(shí)別蛋白條帶的位置大致相同約19kD(見圖3)。

2.4 小鼠血清IgG水平變化

根據(jù)對(duì)小鼠血清IgG水平在0～8周變化趨勢(shì)的檢測(cè)及對(duì)免疫組和對(duì)照組小鼠血清IgG的比較發(fā)現(xiàn)，小鼠血清中IgG的水平隨著免疫次數(shù)及時(shí)間的延長呈上升趨勢(shì)，免疫4周以后同一時(shí)期的免疫組小鼠血清中的IgG水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。表1 兩組小鼠免疫不同時(shí)間血清IgG水平變化

3 討論

本實(shí)驗(yàn)將細(xì)粒棘球蚴鐵蛋白基因重新克隆到表達(dá)載體pET-28a上，主要考慮：① pET-28a表達(dá)載體具有高效表達(dá)的能力［7］；② pET28a質(zhì)粒在插入目的DNA后表達(dá)的蛋白N 末端含6個(gè)組氨酸，它作為His標(biāo)簽蛋白，可與Ni2+鰲合，使得重組融合蛋白在變性或非變性狀態(tài)下均可被含Ni2+的His-band 樹脂親合柱純化，即使被純化的重組蛋白含量很低也能被有效地純化出來?？朔吮局行囊呀?jīng)構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒ferritin/pGEX-6p-1表達(dá)的重組蛋白ferritin/GST不能通過GSTTrapTMFF親和層析柱純化的弊端［3］；③重組蛋白是標(biāo)簽蛋白His和目的蛋白共同組成的融合蛋白，為獲取目的蛋白，本應(yīng)通過相應(yīng)的剪切酶將標(biāo)簽蛋白剪切下來，但由于N-末端組氨酸所表達(dá)的蛋白分子量很小，它的存在不改變目的蛋白的活性，所以無須去除。這不僅能減少實(shí)驗(yàn)步驟，降低純化蛋白在酶切過程中的損失，同時(shí)還可節(jié)省用來購買剪刀酶的費(fèi)用，為后續(xù)研究提供了較好的實(shí)驗(yàn)材料?；诖宋覀兊玫搅艘粋€(gè)高效表達(dá)且易于純化重組蛋白的基因工程菌株，并得到了較純的重組蛋白，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。通過實(shí)驗(yàn)說明Eg.ferritin作為抗原可誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生較強(qiáng)的的體液免疫應(yīng)答，證明其有良好的抗原性；免疫血清與細(xì)粒棘球蚴天然抗原(囊液和原頭蚴)的Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫血清能夠較好地識(shí)別天然抗原中位于19kD處的條帶，說明Eg.ferritin具有較好免疫原性，由此推測(cè)中國大陸株細(xì)粒棘球蚴鐵蛋白基因具有作為包蟲疫苗候選分子的潛能，為進(jìn)行重組鐵蛋白對(duì)宿主的免疫保護(hù)性及保護(hù)性機(jī)制等方面研究的可能性提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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篇9

文章編號(hào)：1004-7484（2013）-01-0295-01

上消化道出血量小于5ml糞便中無可見血液，且紅細(xì)胞破壞，顯微鏡檢查也未件紅細(xì)胞，而需用化學(xué)法、免疫法等才能證實(shí)的出血稱為隱血。檢查糞便隱血的試驗(yàn)稱為糞便隱血試驗(yàn)。糞便隱血試驗(yàn)主要用于消化道出血、消化道腫瘤篩檢和鑒別。腸結(jié)核、Crohh病、胃病、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸息肉、鉤蟲病、消化道惡性腫瘤等。隱血試驗(yàn)對(duì)消化道潰瘍的陽性診斷率為40%-70%。消化道惡性腫瘤陽性率早期為20%，晚期可達(dá)95%，呈持續(xù)陽性。對(duì)胃癌、大腸癌早期檢查仍缺乏較好的手段，但臨床研究證明，消化道腫瘤患者隱血試驗(yàn)陽性率平均為87%，所以糞便隱血檢查具有十分重要的意義。糞便隱血試驗(yàn)有化學(xué)法和免疫學(xué)法?；瘜W(xué)法是根據(jù)血紅蛋白中的亞鐵紅血素有類似過氧化的活性，催化氧化低物鄰甲聯(lián)苯胺脫氫為顯藍(lán)色的鄰甲偶氮苯。免役學(xué)方法是根據(jù)膠體金是有氯化金和枸櫞酸合成的膠體物質(zhì)，呈紫紅色膠體金與單抗人血紅蛋白單克隆抗體和鼠lgG吸附在特制的乙酸纖維膜上，形成一種有標(biāo)記抗體的膠體金物質(zhì)，再在試帶的上端涂上包被單抗人Hb多抗和單抗鼠lgG抗體。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源自我院消化科門診患者收集糞便100份，患者隨機(jī)分為兩組，一組未按醫(yī)囑指引進(jìn)行飲食及藥物控制，稱為無指引組50例，另一組按醫(yī)囑指引進(jìn)行飲食及藥物控制3日，稱為指引組50例。

1.2試劑北京萬華普曼公司的糞便隱血免疫膠體金試紙條，批號(hào)為20120706。

1.3操作方法嚴(yán)格按照各自的試劑盒說明書及“實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)”中的方法進(jìn)行，對(duì)收集的每份標(biāo)本分別用3種方法進(jìn)行平行雙份檢測(cè)，即兩點(diǎn)不同部位取樣。

2結(jié)果

聯(lián)苯胺法無指引組敏感性為92.1%，假陽性率為13.8%；指引組敏感性為92.9%，假陽性率為6.9%。貝索試紙法無指引組敏感性為86.7%，假陽性率為7.5%；指引組敏感性為87.1%，假陽性率為5.8%。

3討論

美國胃腸病學(xué)學(xué)會(huì)推薦愈創(chuàng)木酯化學(xué)法或免役法。單克隆抗體免疫膠體金試紙條只針對(duì)人血紅蛋白抗原表應(yīng)，基本排除了飲食及藥物等因素的干擾，但成本偏高，在一定程度上限制了其推廣作用。

篇10

關(guān)鍵詞：2型糖尿?。谎?；C肽；胰島素；化學(xué)發(fā)光免疫分析

2013年全球大約有3.82億人患有糖尿病，而2型糖尿病占據(jù)了其中90%[1，2]。我國近年來2型糖尿病發(fā)病率也在不斷攀升[3]，因此對(duì)糖尿病患者進(jìn)行早期診斷及分型顯得尤為關(guān)鍵。而化學(xué)發(fā)光免疫分析是目前免疫檢驗(yàn)中技術(shù)領(lǐng)先的檢測(cè)方法，具有準(zhǔn)確性高，污染小，操作方便，檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，已得到廣泛普及使用[4]。我院采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定儀對(duì)110例初診為2型糖尿病患者，63例健康體檢者進(jìn)行了血清C肽和胰島素測(cè)定，以期探討更有效更簡便的糖尿病早期診斷檢測(cè)方法。

1 資料與方法

1.1一般資料 糖尿病組：收錄2013年10月～2014年3月本院首次確癥的2型糖尿病患者110例，其中男68例，女42例；平均年齡（46.73±8.46）歲。對(duì)照組：63例健康體檢者，男37例，女26例；平均年齡（47.16±7.20）歲，63例健康體檢者肝腎功能、血尿常規(guī)、血糖血脂水平均正常，且無糖尿病病史。兩組患者在性別、年齡方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器 深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)的邁格魯米（MAGLUMI）2000型化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀。

1.2.2試劑 深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀配套試劑，包括C肽測(cè)定試劑盒，胰島素測(cè)定試劑盒。

1.3方法 173例受試者均于檢測(cè)前1晚晚餐后開始禁食，在檢測(cè)當(dāng)天早晨空腹抽取肘部靜脈血5mL。血液采集后均于室溫下靜置后離心，分離血清部分，并于2h內(nèi)放于Maglumi2000化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀檢測(cè)血清中C肽和胰島素水平。測(cè)定時(shí)嚴(yán)格按照操作說明執(zhí)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)利用SPSS 19統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，獲得數(shù)據(jù)以（x±s）表示。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異處理。

2 結(jié)果

2.1檢測(cè)性能檢驗(yàn) 采用深圳新產(chǎn)業(yè)化學(xué)免疫分析儀及配套試劑測(cè)定C肽、胰島素濃度水平，其中兩項(xiàng)批內(nèi)變異系數(shù)（CV）均≤5%，批間變異系數(shù)（CV）均≤10%。C肽分析靈敏度為0.01ng/mL，胰島素分析靈敏度為0.3μIU/mL（見表1）。C肽測(cè)定約25min出第一個(gè)結(jié)果，之后每分鐘完成3個(gè)測(cè)試果；胰島素則約37min出首個(gè)結(jié)果，之后每分鐘完成3個(gè)檢測(cè)。

2.2檢測(cè)結(jié)果比較 經(jīng)過SPSS 19數(shù)據(jù)軟件處理，2型糖尿病組患者基礎(chǔ)C肽平均濃度水平為（3.37±0.89）ng/mL，基礎(chǔ)胰島素平均水平為（22.32±7.18）μIU/mL，而健康體檢組人群基礎(chǔ)C肽平均濃度水平為2.11±0.97ng/mL，基礎(chǔ)胰島素平均水平為（13.50±3.77）μIU/mL。糖尿病組餐前C肽、胰島素水平與健康體檢組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

胰島素是由胰島B細(xì)胞合成份泌，分子量5734，半衰期只有5min。胰島素的分泌受各種刺激所影響，如脂肪、蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物、胃泌素、胰泌素、抑胃肽等，葡萄糖是最強(qiáng)的刺激物質(zhì)。而兒茶酚胺、α-腎上腺素、生長抑素、苯妥英鈉對(duì)胰島素的分泌起抑制作用[5]。C肽是一種分子量為3018的多肽，半衰期大約為30min。在胰島B細(xì)胞中，胰島素原被酶促裂解為胰島素（A鏈加B鏈）和C肽分子，二者同時(shí)以等摩爾濃度被分泌入血液中。但由于胰島素半衰期短，直接受肝臟的代謝作用，且血液循環(huán)中的胰島素抗體以及外源性的胰島素療法及其他藥物也會(huì)干擾人體內(nèi)胰島素水平，故血清胰島素水平通常并不能代表胰島細(xì)胞的分泌功能。而胰島細(xì)胞分泌的C肽半衰期較長，含量水平不受體內(nèi)、體外胰島素等影響，也不被肝臟滅活或代謝，其血清水平能較準(zhǔn)確地代表胰島細(xì)胞功能。因而，在測(cè)定胰島素的同時(shí)對(duì)C肽進(jìn)行測(cè)定，將獲得更加有效的結(jié)果，更能為準(zhǔn)確地了解胰島細(xì)胞的合成與分泌能力，為臨床2型糖尿病早期診斷提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光免疫分析方法測(cè)定C肽、胰島素靈敏度高，批內(nèi)變異系數(shù)、批間變異系數(shù)小，且檢測(cè)速度快，有利于早期糖尿病的輔助診斷。對(duì)比分析兩組測(cè)定結(jié)果提示，糖尿病患者空腹測(cè)定前，其體內(nèi)C肽、胰島素均有一定儲(chǔ)備，說明2型糖尿病組受檢者體內(nèi)存在一定程度胰島素抵抗，機(jī)體自身無法有效識(shí)別胰島素，而最終造成血液循環(huán)中C肽，胰島素基礎(chǔ)含量水平抬高，符合二型糖尿病的基礎(chǔ)定義。

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