導(dǎo)語：如何才能寫好一篇動物行為學(xué)的研究方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

比較行為學(xué)是比較醫(yī)學(xué)的一個分支，是一門多學(xué)科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學(xué)科，通過本門課程的學(xué)習(xí)，可以提高學(xué)生對人類行為的更深層次的理解和認(rèn)識，并通過研究動物模型的行為內(nèi)涵，建立可以評價的行為研究方法與人類行為內(nèi)涵的比較，進(jìn)而為人類行為研究提供基礎(chǔ)。比較行為學(xué)研究的主要內(nèi)容包括行為的遺傳學(xué)傾向、行為的生理基礎(chǔ)、動物行為特點和研究方法、自發(fā)和社會行為研究方法、認(rèn)知行為研究方法、攝食行為研究方法、阿爾茨海默病動物模型及研究方法、帕金森病動物模型及行為研究方法等。本課程不僅可以開闊學(xué)生的視野，增加對生物體行為的了解，也可以為學(xué)生進(jìn)一步學(xué)習(xí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程奠定基礎(chǔ)。

2教學(xué)概況

吉林醫(yī)藥學(xué)院面向本科各專業(yè)開設(shè)了比較行為學(xué)選修課，內(nèi)容涉及行為的遺傳學(xué)基礎(chǔ)、嚙齒動物的行為生理學(xué)、動物行為特征及研究方法、嚙齒動物的自發(fā)與社會行為研究、認(rèn)知行為研究方法、攝食行為模型與研究方法、運動行為研究方法、跑臺與動物模型運動研究、阿爾茨海默病動物模型及行為分析、精神疾病動物模型及相關(guān)行為學(xué)研究、帕金森病動物模型和行為研究方法等。選修課和必修課的性質(zhì)不同，且學(xué)生多憑興趣選取，所以在教學(xué)方法上可更加靈活多樣，教學(xué)中采用多媒體結(jié)合視頻的教學(xué)形式，且二者占用學(xué)時相同，因而更為生動地展現(xiàn)了相關(guān)行為學(xué)案例，同時教學(xué)中結(jié)合了課堂討論、課后作業(yè)、課前提問等方式，不僅使學(xué)生加深理解，又激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，給學(xué)生更加深刻的學(xué)習(xí)氛圍，開闊視野，達(dá)到很好的教學(xué)效果。課程考核采用作業(yè)和平時成績相結(jié)合的方式進(jìn)行。講完相應(yīng)的知識點，讓學(xué)生根據(jù)知識點查閱資料，圍繞知識點書寫相關(guān)課題的近幾年研究成果，完成作業(yè)，回收率達(dá)到100%。平時成績主要考察學(xué)生平時課堂表現(xiàn)。課程結(jié)束后，對課程學(xué)習(xí)情況等進(jìn)行問卷調(diào)查，了解學(xué)生對課程的學(xué)習(xí)情況以及意見和建議，不斷完善課程教學(xué)。

3問卷調(diào)查

在課程結(jié)束時，對選修本課程的各專業(yè)學(xué)生進(jìn)行問卷調(diào)查，范圍包括2013級臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗、醫(yī)學(xué)影像、護(hù)理學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等本科各專業(yè)共124名學(xué)生，幾乎涵蓋了所有醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)；調(diào)查內(nèi)容主要包括選修該課程的原因、課程中印象深刻的內(nèi)容、期望學(xué)習(xí)的內(nèi)容等，期望通過調(diào)查能夠了解學(xué)生選修這門課程的真正原因、在修習(xí)這門課程中的收獲以及對這門課程更高的期望等，從而探討這門課程在醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)的重要性和必要性。發(fā)放124份問卷調(diào)查表，收回有效問卷117份，有效回收率為94%，調(diào)查主要項目內(nèi)容及結(jié)果如下。

1）關(guān)于選擇比較行為學(xué)課程原因的調(diào)查。結(jié)果顯示，66%的學(xué)生是因為對這門課程感興趣，因好奇而選修的學(xué)生占19%，只有5%的學(xué)生僅為修學(xué)分而選擇該門課程，其他原因占10%。結(jié)果表明，多數(shù)學(xué)生（85%）在選擇這門課程的時候是以興趣愛好為主，說明醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)學(xué)生對這門課程感興趣或者好奇的程度非常高，也間接反映出在醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)這門課程的重要性。

2）關(guān)于對印象深刻內(nèi)容的調(diào)查。結(jié)果顯示，學(xué)生對動物行為特征和人類相關(guān)疾病等方面的內(nèi)容印象較為深刻，分別占到64%和36%，其他（表觀遺傳學(xué)等）占4%。提示多數(shù)學(xué)生對行為學(xué)方面的知識以及人類相關(guān)疾病方面的學(xué)習(xí)興趣和效果較好，這些都是學(xué)生平時感興趣但沒有機會深入學(xué)習(xí)的內(nèi)容，因而在課程結(jié)束后對相關(guān)內(nèi)容印象非常深刻。

3）關(guān)于對期望學(xué)習(xí)的內(nèi)容調(diào)查。結(jié)果顯示，多數(shù)學(xué)生期望更多地了解人與人以及人與動物方面行為比較的內(nèi)容（分別占21%、15%），說明學(xué)生在選修這門課程后，期望了解更多相關(guān)知識，這也反映出這門課程對學(xué)生的意義。從問卷調(diào)查結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生對比較行為學(xué)課程感興趣程度非常高，一部分學(xué)生對這門課程不了解，因為好奇選擇這門課程，更多的學(xué)生對這門課程是充滿興趣的，期望了解相關(guān)知識。而經(jīng)過課程學(xué)習(xí)后，多數(shù)學(xué)生對課程內(nèi)容掌握較好，尤其是關(guān)于動物行為和人類相關(guān)疾病方面的內(nèi)容印象更為深刻，這些內(nèi)容一方面是與生活和專業(yè)密切相關(guān)的，如自閉癥、帕金森等人類相關(guān)疾病，另一方面學(xué)生對動物行為感興趣程度很高，因此，學(xué)過之后印象極為深刻。而且多數(shù)學(xué)生對比較行為學(xué)課程內(nèi)容提出一些新的要求和期望，也表明學(xué)生在學(xué)習(xí)過后，不僅了解和掌握了這門課程相關(guān)內(nèi)容，而且期望學(xué)習(xí)更多，體現(xiàn)出很強的求知欲，而這種興趣和求知欲正是學(xué)生在醫(yī)學(xué)課程學(xué)習(xí)中最為缺乏的，也是醫(yī)學(xué)教學(xué)改革中期望激發(fā)的。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)發(fā)展進(jìn)步，各學(xué)科的知識不斷擴(kuò)張，學(xué)科之間的相互交叉不斷衍生大量邊緣學(xué)科和綜合學(xué)科。比較行為學(xué)作為一門多學(xué)科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學(xué)科，與行為學(xué)、解剖學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)、藥理學(xué)、病理生理學(xué)、醫(yī)學(xué)機能學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等有很深的關(guān)聯(lián)性，能將基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)中的很多學(xué)科聯(lián)系在一起，從而加深學(xué)生對基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各學(xué)科的學(xué)習(xí)欲望，這正是這門課程開設(shè)的重要作用。

4意義

比較行為學(xué)與醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生的基礎(chǔ)課和專業(yè)課的學(xué)習(xí)關(guān)系密切，通過比較行為學(xué)的學(xué)習(xí)，可以幫助學(xué)生更加深層次地理解醫(yī)學(xué)課程。如行為與遺傳學(xué)密切關(guān)聯(lián)，比較行為學(xué)可以幫助學(xué)生了解基因如何影響和控制行為；行為學(xué)與解剖學(xué)及生理學(xué)相關(guān)，每一個物種都會不斷接受來自環(huán)境的各種刺激，為了生存和繁衍，必須具有可接受各種信息的感受器，還需靠效應(yīng)器和內(nèi)分泌系統(tǒng)對外界刺激做出適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，通過比較行為學(xué)的學(xué)習(xí)，可以加深對解剖結(jié)構(gòu)及相應(yīng)生理學(xué)知識的理解；行為學(xué)與藥理學(xué)、病理生理學(xué)及醫(yī)學(xué)機能學(xué)有關(guān)聯(lián)性，比較行為學(xué)研究中常用的各種動物模型，包括學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的疾病動物模型如瞬膜條件反射模型、創(chuàng)傷性腦損傷動物模型、腦缺血模型、老年癡呆模型、帕金森病動物模型制備等，這些都需要藥理學(xué)、病理生理學(xué)及醫(yī)學(xué)機能學(xué)知識為支撐。在模型制備的基礎(chǔ)上，還可以引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)一些機能學(xué)實驗，如研究學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)的迷宮（Morris水迷宮、T型迷宮、放射狀或輻射狀迷宮、Barnes迷宮、高架十字迷宮）、場景性和提示性恐懼條件反射、被動和主動回避實驗、物體識別實驗、條件性厭食癥、瞬膜條件反射、嗅覺任務(wù)實驗及種群識別等實驗。為適應(yīng)21世紀(jì)醫(yī)學(xué)科學(xué)和衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展的要求，很多高校陸續(xù)開展以器官系統(tǒng)為中心的課程教改模式，比較行為學(xué)作為各學(xué)科交叉的綜合性學(xué)科，有利于基礎(chǔ)與臨床學(xué)科內(nèi)容之間的結(jié)合，有利于提高基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)，有利于學(xué)生豐富知識與提高能力。

5結(jié)語

篇2

[關(guān)鍵詞] 二至百合濃縮膏；抗焦慮；雌性大鼠；去勢；高架十字迷宮；明暗箱

[中圖分類號] R363 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）12-20-03

更年期綜合征是婦女在這一時期由于雌激素水平下降所致的以機體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群。二至百合組方中包含女貞子、旱蓮草、百合、知母、牡蠣等中藥組成成分，具有滋陰潛陽，退熱安神之功效。主要用于婦女更年期初期，證見陰虛陽亢，陰虛發(fā)熱，骨蒸潮熱，焦慮煩躁，失眠多夢者。本實驗通過雌性大鼠雙側(cè)卵巢祛除術(shù)復(fù)制大鼠更年期綜合征模型，觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學(xué)指標(biāo)的影響，初步評價藥物的改善更年期焦慮作用。

1 資料與方法

1.1 藥品及試劑

二至百合濃縮膏，北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司（批號20120902）。

1.2 實驗動物

Wistar大鼠，75只，雌性，體重（200±20）g，SPF級，購自中國人民軍事科學(xué)院實驗動物中心。許可證編號：SCXK-（軍）2007-004。

1.3 儀器

海爾BCD-257SL冷藏冷凍冰箱：青島海爾股份有限公司；Sartorious BT 124S電子精密天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；明暗穿梭箱、高架十字迷宮、高架十字迷宮實驗視頻分析系統(tǒng)、SLY-ETS小動物行為活動記錄分析系統(tǒng)，均由北京碩林苑科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 方法

1.4.1 動物模型制備與分組 在適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，將75只大鼠隨機分為5組，分別為：假手術(shù)空白組，模型組，二至百合高劑量（1.92 g濃縮膏/kg）、中劑量（0.96 g濃縮膏/kg）、低劑量（0.48 g濃縮膏/kg）組，每組15只。

模型組及受試樣品3個劑量組制備雌性去勢大鼠（雙側(cè)卵巢切除術(shù)）模型[1-2]：大鼠0.1%戊巴比妥鈉0.5 mL/100 g體重（50 mg/kg）腹腔注射麻醉。麻醉大鼠取俯臥位，在背部中1/3處剪毛、備皮，碘伏常規(guī)消毒。自腰椎沿背部正中線向下做縱行切口約2～3 cm，切開皮膚，沿肩胛線分別于左右兩肋下剪開腰肌，暴露出卵巢及緊密相連的子宮，在子宮角上做兩個結(jié)扎，結(jié)扎后切斷，將卵巢摘除，縫合皮膚。術(shù)后連續(xù)腹腔注射72萬U/kg青霉素，以防感染，1次/d，連續(xù)3 d。術(shù)后第3天開始給大鼠陰道涂片觀察，連續(xù)5 d，每天1次，以確定卵巢完全切除。實驗動物從術(shù)后的第5天起全部進(jìn)入動情間期，但動物不再出現(xiàn)動情前期，動情期的雌激素變化，動物基本上符合“更年期”表現(xiàn)。假手術(shù)空白組大鼠除不行卵巢摘除外，其余步驟同模型組。

造模后9 d，除假手術(shù)空白組和模型組給予等體積蒸餾水外，其余各組開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)45 d后分別進(jìn)行高架十字迷宮和明暗箱行為學(xué)實驗測試（先開展高架十字迷宮實驗，其后間隔1周后開展明暗箱實驗）。

1.4.2 大鼠高架十字迷宮實驗 末次給藥30 min后，進(jìn)行高架十字迷宮行為學(xué)的測評。實驗開始時，將大鼠放入高架十字迷宮中央，頭朝開臂，觀察5 min內(nèi)大鼠的活動情況[3-5]。觀察并記錄以下各項指標(biāo)：進(jìn)入開臂次數(shù)，進(jìn)入閉臂次數(shù)，以及在兩臂的滯留時間。分別計算大鼠進(jìn)入開臂的時間占總時間（開臂和閉臂滯留的時間之和）的百分比（open arm time percent，OT%），以及大鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)占總次數(shù)（開臂與閉臂之和）的百分比（open arm entry percent，OE%）。觀察時以大鼠四爪均進(jìn)入開臂或閉臂為準(zhǔn)。

1.4.3 大鼠明暗箱實驗 末次給藥30 min后，將大鼠置于明箱中央，背朝通道，觀察5 min內(nèi)大鼠的活動情況并記錄明暗箱停留時間和穿箱次數(shù)。

以上兩種行為學(xué)檢測實驗操作時，應(yīng)保持外界環(huán)境安靜，每次放入大鼠前清理干凈箱內(nèi)的排泄物，盡可能保證每批次檢測的客觀性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以（）表示，數(shù)據(jù)先進(jìn)行方差齊性檢驗。方差齊選用One-Way ANOVA法進(jìn)行各組間比較；方差不齊選用t檢驗進(jìn)行組間比較。

2 結(jié)果

2.1 二至百合濃縮膏對去勢大鼠高架十字迷宮行為活動的影響

實驗結(jié)果顯示，模型組組大鼠與假手術(shù)空白組比較，OE%和OT%顯著減?。ň鵓

2.2 二至百合濃縮膏對去勢大鼠明暗箱穿梭行為的影響

研究結(jié)果顯示，模型組大鼠明箱停留時間和穿箱次數(shù)均顯著降低，與假手術(shù)空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別P

3 討論

更年期綜合征[6]屬于中醫(yī)學(xué)“絕經(jīng)前后諸癥”范疇，歷代文獻(xiàn)關(guān)于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中。絕經(jīng)前后腎臟虛損，腎氣漸衰，耗傷，陰陽平衡失調(diào)，臟腑功能紊亂而出現(xiàn)絕經(jīng)前后諸癥證候[7]。隨著我國人口結(jié)構(gòu)不斷老齡化和社會競爭日益激烈，不良的工作環(huán)境、家庭關(guān)系緊張及精神等因素影響，婦女進(jìn)入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使更年期焦慮癥的發(fā)病率亦明顯增加[8]。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會意義。

二至百合方由經(jīng)典方劑“二至丸”和“百合知母湯”合方加減而成，具有滋陰潛陽，退熱安神之功效。本研究主要通過雌性大鼠卵巢祛除術(shù)復(fù)制大鼠更年期綜合征模型，進(jìn)而采用高架十字迷宮和明暗箱實驗觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學(xué)的影響，評價處方的改善更年期綜合征焦慮作用。

高架十字迷宮模型，為抗焦慮研究中公認(rèn)的非條件反射模型，是抗焦慮研究中應(yīng)用最廣泛的模型之一[9]。它利用動物對新異環(huán)境的探究特性相對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，進(jìn)入開放臂的百分?jǐn)?shù)（OE%）和在開放臂停留時間的百分?jǐn)?shù)（OT%）反映的是動物趨近規(guī)避沖突的結(jié)果，與焦慮程度直接相關(guān)。通?？菇箲]藥只增加動物對開放臂的探索，使OE%和OT%上升。開放臂和封閉臂總進(jìn)入次數(shù)反映了動物總的運動能力，可用來觀察藥物有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強度。被保護(hù)區(qū)的活動性一定程度上與抗焦慮劑的效應(yīng)相關(guān)[10]焦慮動物的OE%和OT%明顯降低，經(jīng)典抗焦慮藥物則使兩者升高[11]；明暗箱行為實驗[12-13]中，明箱活動時間越長，探洞和穿梭次數(shù)越多，反映實驗動物對新環(huán)境的探索欲望水平越高，探索欲越強則代表環(huán)境適應(yīng)能力越強，焦慮水平越低。

本實驗以去勢大鼠造成更年期模型，考慮動物行為檢測的個體差異可能比較大，所以本實驗選用了較為經(jīng)典的2種焦慮行為檢測方法進(jìn)行二至百合膠囊的抗焦慮實驗。本研究表明，高架十字迷宮實驗中，與假手術(shù)空白組比較，去勢大鼠進(jìn)入開閉時間和次數(shù)的百分率顯著下降，在明暗箱實驗中，與假手術(shù)空白對照組比較，去勢大鼠在明箱停留時間明顯縮短，穿箱次數(shù)明顯減少。由此提示，去勢動物處于焦慮狀態(tài)。高架十字迷宮實驗中，二至百合濃縮膏3個劑量組均可增加去勢大鼠OE%和OT%值，與模型組比較，中劑量組OE%和OT%值有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道含有百合[14-15]、知母[16-17]等藥物組方在臨床上對更年期綜合征具有明顯治療作用，有實驗表明含有女貞子[18]的復(fù)方藥物連續(xù)灌胃可明顯降低更年期大鼠血清促性腺激素FSH含量，對血清E2含量有顯著增加作用，使更年期陰虛內(nèi)熱、煩躁不安、失眠等癥狀得以緩解。

本實驗研究結(jié)果表明二至百合方對更年期焦慮癥狀有明顯改善，對更年期綜合征有一定的緩解作用，但是二至百合方改善更年期綜合征模型大鼠焦慮行為學(xué)的作用機理有待進(jìn)一步深入研究。

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篇3

【摘要】 目的 觀察補腎化痰法對AD模型大鼠行為學(xué)的影響并探討其可能機制。方法 應(yīng)用腦立體定向技術(shù)給大鼠BNM注射凝聚態(tài)Aβ2535＋I(xiàn)BO構(gòu)建AD模型。注射2周后，高、中、低量組分別給大鼠該藥水煎液灌胃；西藥組用哈伯因混懸液灌胃；正常組、空白組、模型組均給予等容積的生理鹽水灌胃。28 d后采用Morris 水迷宮進(jìn)行行為學(xué)評價。結(jié)果 行為學(xué)結(jié)果顯示高、中、低量組和西藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短（P

【關(guān)鍵詞】 補腎化痰法； Alzheimer； 行為學(xué)

【Abstract】 Objective To observe effects and function mechanism of replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy on behavior in the rat of AD.Methods Application of technology to stereotactic brain of rats injected BNM condensed Aβ2535 + IBO build AD model. 2 weeks after injection， high， medium and low volume of the rats were administered the drug decoction; western medicine group with Huperzine oral suspension; normal group， blank group， model group were given equal volume of normal saline ig. 28 days after the Morris water maze used for behavioral evaluation.Results Behavioral results showed high， medium and low volume group and western medicine group than the average incubation period of the model group was significantly shorter (P

【Key words】 replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy; Alzheimer; behavior

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以進(jìn)行性記憶障礙和智能衰退為主要臨床特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，隨著人口老齡化的日趨嚴(yán)重，AD已經(jīng)成為危害老年人健康的主要疾病之一［1］，是目前公認(rèn)具有世界性的公共衛(wèi)生事業(yè)重大問題，被稱為“即將到來的21世紀(jì)的瘟疫”［2，3］。目前AD病因和病理機制尚未完全明了，更無確切療效的藥物。尋找確能根治AD藥物已成為當(dāng)今國際熱點課題之一。

目前西醫(yī)主要是對癥治療，治療的目的是延緩AD的進(jìn)展和促進(jìn)神經(jīng)元的功能恢復(fù)以改善癥狀。治療的策略是根據(jù)現(xiàn)有損害神經(jīng)元的各種因素或AD腦中代謝異常來設(shè)計不同作用位點的各種藥物，但是這些藥物價格昂貴，毒副作用較大，不能支持老年人用藥的要求［4，5］。中醫(yī)藥在延緩衰老以及衰老相關(guān)疾病的防治方面有著豐富的理論和實踐經(jīng)驗，以其療效較好、綜合效益高、副作用少而顯示了良好的前景。為此，我們首先建立了大鼠AD模型，并采用Morris 水迷宮進(jìn)行行為學(xué)測試，觀察補腎化痰法對AD模型大鼠行為學(xué)的影響，并用哈伯因混懸液作對照，旨在進(jìn)一步探討中藥治療AD的作用及機理。

1 實驗材料

1.1 動物

15月齡Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重450±50 g，由湖北省實驗動物研究中心提供。

1.2 主要試劑

Aβ2535和IBO購于Sigma公司。

1.3 主要儀器和設(shè)備

Morris水迷宮裝置（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院），腦立體定位儀（北京碩林苑科技有限公司），微量注射器 1 μl（上海醫(yī)用激光儀器廠），電子天平（AL104，梅特勒托利多公司）。

1.4 藥物

補腎化痰方由制首烏、石菖蒲、竹節(jié)參、茯苓、陳皮、半夏、白芥子等組成，購自湖北中醫(yī)學(xué)院國醫(yī)堂門診部。中藥經(jīng)水煎制成濃縮液。哈伯因，購自河南眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號:060321.

2 實驗方法

2.1 動物分組

①Aβ2535+IBO模型組（簡稱模型組），②假手術(shù)組（簡稱空白組），③正常組， ④哈伯因治療組（簡稱西藥組），⑤補腎化痰法高劑量組（簡稱高量組），⑥補腎化痰法中劑量組（簡稱中量組），⑦補腎化痰法低劑量組（簡稱低量組）。

2.2 AD模型構(gòu)建

模型組大鼠用2 ％戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉后，固定于腦立體定位儀上，顱頂正中切開暴露至顱骨，根據(jù)大鼠顱腦立體定位圖譜，對基底核立體定位（位置:前囟后 3.8 mm，中線旁開 2.5 mm，深度 3 mm），用牙科鉆鉆開顱骨，用1 μl 微型進(jìn)樣器注射針5 min 內(nèi)緩慢注入Aβ2535+IBO混合液 1 μl，留針10 min.注射完畢后以局部軟組織封閉針孔，縫合皮膚。術(shù)后給予青霉素鈉鹽 5 萬單位肌注，每天1次，連續(xù) 3 d.空白組在定位下給予大鼠BNM一次性注射 1 μl 滅菌生理鹽水。

2.3 給藥

腦內(nèi)注射2周后給藥。給藥量均按人與大鼠體表面積系數(shù)比確定，以臨床人用藥等效劑量為中劑量，模型組、空白組、正常組給予生理鹽水灌胃，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.西藥組給予哈伯因混懸液灌胃，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.高量組、中量組、低量組分別給予補腎化痰方水煎液灌胃，含生藥分別是2 g/ml，1 g/ml，0.5 g/ml，1 ml/100 g·d，連續(xù)28 d.

2.4 檢測指標(biāo)及方法

2.4.1 Morris水迷宮實驗 造模結(jié)束后進(jìn)行Morris水迷宮行為檢測，評價其學(xué)習(xí)記憶成績。主要進(jìn)行定位航行和空間探索實驗。

2.4.1.1 定位航行實驗 定位航行實驗用于測量大鼠通過一段訓(xùn)練后，對空間的學(xué)習(xí)記憶能力。每日上下午各4次，將大鼠面向池壁分4個象限放入水中，記錄其在2 min內(nèi)尋找到平臺的時間（逃避潛伏期）。如果大鼠在2 min內(nèi)未找到平臺，則用手牽引其至平臺上，讓大鼠停留10 s，計算機會自動記錄大鼠在實驗期間的行程，并轉(zhuǎn)換為行程轉(zhuǎn)跡圖，所經(jīng)過長度、所需的時間，每個象限的行程長度、每個象限行程的時間、速度、各個象限的行程長度占總長度的百分比，各個象限的行程時間占總時間的百分比。數(shù)據(jù)的采集和處理由Morris迷宮圖像自動監(jiān)視處理系統(tǒng)完成，歷時4 d.

2.4.1.2 空間探索實驗 5 d撤除平臺，進(jìn)行空間探索實驗。將大鼠任選1個入水點放入水中，記錄其2 min內(nèi)跨越原平臺位置的次數(shù)。

兩實驗還記錄大鼠在平臺象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區(qū)域游泳距離百分比，以判斷動物記憶儲存及再提取能力。

2.5 統(tǒng)計處理

所有計量檢測結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用SPSS FOR WINDOWS 15.0統(tǒng)計軟件包統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果

3.1 大鼠平均逃避潛伏期

在實驗前兩天，各組動物基本圍繞池壁游泳，較少游向平臺附近，其運動軌跡呈隨機分布于各象限之中。但隨著實驗的推進(jìn)，正常組、空白組大鼠依靠空間線索找到平臺位置的時間逐漸縮短，其運動軌跡也慢慢位于平臺象限，或者在平臺象限相鄰兩側(cè)的象限尋找，其潛伏期迅速下降。但模型組大鼠除極少數(shù)能找到平臺外，基本保持前兩天時的情形，稍有改善。為分析信息獲取能力，測量了4 d訓(xùn)練的總潛伏期和訓(xùn)練末2 d的后潛伏期。從表1可知，模型組平均潛伏期比正常組和空白組明顯延長，有統(tǒng)計學(xué)意義（P

3.2 大鼠平均游泳距離

定位航行實驗中，觀察了實驗大鼠在實驗平臺象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區(qū)域游泳距離百分比（分別簡稱象限百分比、20 %區(qū)域、40 %區(qū)域）(見表2)。從表中可見，模型組大鼠游泳的象限百分比較正常組和空白組大鼠明顯縮短。高、中量組的象限百分比較模型組有明顯提高（P0.05)。進(jìn)一步的組間比較發(fā)現(xiàn)低量組與西藥組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)。低量組20 %、40 %區(qū)域與西藥組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P

3.3 大鼠搜索平臺變化趨勢

大鼠在尋找平臺的過程中表現(xiàn)出不同方式，一些大鼠進(jìn)入水池后無目的游動，往往速度較快，但經(jīng)常找不到平臺；還有一些大鼠經(jīng)過幾次訓(xùn)練后，對環(huán)境的記憶已經(jīng)非常深刻，一入水直接游向平臺；更多的大鼠在學(xué)習(xí)過程中總是注意觀察周圍的環(huán)境，并識別水池內(nèi)壁的不同圖形標(biāo)志，根據(jù)標(biāo)志與平臺的相對位置去尋找平臺，這些大鼠總是先游到某一特定的象限，看到標(biāo)志后又到平臺。從表3中可看出，模型組大鼠空間搜索能力顯著下降，其象限百分比較正常組和空白組明顯縮短（P

3.4 大鼠跨越平臺的次數(shù)

對各組大鼠跨越原平臺位置的次數(shù)進(jìn)行了比較，從表4中可看出，模型組大鼠較正常組和空白組大鼠跨越原平臺位置次數(shù)明顯下降，有統(tǒng)計學(xué)意義（P

4 討論

AD早期表現(xiàn)主要是健忘，并伴有其他高級功能的障礙，學(xué)習(xí)記憶障礙是AD患者一個重要的臨床癥狀和特征。AD最早和最重要的癥狀之一是比較突出的近期記憶受損［6］。

Aβ2535和IBO腦內(nèi)注射可以很好地模擬AD行為學(xué)和病理學(xué)表現(xiàn)，但仍缺乏深入的行為學(xué)研究，作者用Morris水迷宮行為評價該模型的行為學(xué)特征具有重要意義。Morris水迷宮實驗?zāi)軌蜉^準(zhǔn)確地反映動物的學(xué)習(xí)記憶能力，可作為檢測實驗動物學(xué)習(xí)記憶水平的重要工具。Morris水迷宮所檢測的是大鼠在多次的訓(xùn)練中，學(xué)會尋找固定位置的隱藏平臺，形成穩(wěn)定的空間位置認(rèn)知，這種空間認(rèn)知是加工空間信息（外部線索）形成的，所形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種空間參考記憶進(jìn)入意識系統(tǒng)，其儲存的機制主要涉及邊緣系統(tǒng)（如海馬）以及大腦皮層有關(guān)腦區(qū)，屬于陳述性記憶。而臨床健忘和癡呆的患者，正是陳述性記憶首先受損，而且比較突出。所以從檢測的記憶屬性來說，運用Morris水迷宮行防治此類疾病有效藥物的篩選研究比較恰當(dāng)。通過比較前幾天的訓(xùn)練情況，可以獲得動物獲取空間信息的能力和學(xué)習(xí)的能力，而探索實驗可以判斷動物記憶儲存能力及提取再現(xiàn)能力。

本實驗采用凝聚態(tài)的Aβ2535和IBO直接注射大鼠BNM建立AD模型，2周后用水迷宮觀察了大鼠學(xué)習(xí)記憶的變化［7～9］。在水迷宮實驗中，隨著學(xué)習(xí)次數(shù)的增加，各組大鼠逃避潛伏期和游泳距離逐漸縮短，說明各組大鼠在4 d游泳訓(xùn)練中對于尋找平臺均有一定的學(xué)習(xí)記憶能力。但是，不同組之間改變顯著不同，表現(xiàn)了大鼠不同的學(xué)習(xí)記憶能力。模型組在水中游泳尋找平臺的潛伏期明顯高于正常組和空白組；隨著訓(xùn)練時間的延長，模型組大鼠找到平臺的時間逐漸縮短，縮短的幅度較正常組和空白組均小。在平臺的停留位置亦少于正常組和空白組。對大鼠在尋找平臺過程中表現(xiàn)出的不同方式比較發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠往往采取直接游向平臺，或者根據(jù)水池壁標(biāo)志尋找平臺的方式較快地找到平臺，表明這些大鼠對環(huán)境的記憶已經(jīng)非常深刻，空間定向能力好，而模型組大鼠進(jìn)入水池后無目的地游動，經(jīng)常找不到平臺。從大鼠定位航行實驗、空間搜索實驗、跨越原平臺位置次數(shù)實驗的結(jié)果顯示，該模型具有認(rèn)知功能障礙。通過補腎化痰法和哈伯因干預(yù)，補腎化痰法高、中、低量組和西藥組較模型組大鼠逃避潛伏期縮短，跨越原平臺次數(shù)增加，表明補腎化痰法對AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有改善作用。

AD屬中醫(yī)學(xué)的呆病、郁證、文癡等范疇，以本虛標(biāo)實為主要特征，本虛在于腎的精氣不足，標(biāo)實在于痰濁，一方面腎虛為主的臟腑功能失調(diào)可導(dǎo)致痰濁的產(chǎn)生，即因虛致實，另一方面，痰濁為患又可影響氣血津液的化生和運行，致本虛更甚，即因?qū)嵍绿摚瑑烧呋橐蚬?，形成惡性循環(huán)，以致病程纏綿，見癥多端，所以本病以補腎化痰為基本治法［10，11］。

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篇4

【關(guān)鍵詞】 益智寧神口服液/藥理學(xué);抽動—穢語綜合征/中藥療法;神經(jīng)遞質(zhì);疾病模型，動物;大鼠;色譜法，高壓液相

抽動—穢語綜合征(Tourette syndrome，TS)，又稱多發(fā)性抽動癥，是一種兒童期發(fā)病的慢性神經(jīng)精神障礙性疾病。臨床表現(xiàn)主要為突然、快速、反復(fù)、非節(jié)律性、不自主和刻板的運動性抽動和發(fā)聲性抽動，還可能伴有各種行為紊亂、強迫觀念與行為、認(rèn)知障礙等，可不同程度地干擾和損害兒童的認(rèn)知功能，影響社會適應(yīng)能力。本病病因尚未明確，具有明顯的遺傳傾向，多見于4～12歲的兒童，患病率約為005%～3%，近年來發(fā)病呈明顯上升趨勢，男孩多于女孩[1]。廣東省中醫(yī)院兒科在臨床實踐中運用自擬方益智寧神口服液治療該病，取得了較好的療效[2]。本實驗應(yīng)用亞氨基二丙腈腹腔注射建立抽動—穢語綜合征模型大鼠，觀察該藥對模型大鼠行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

11實驗動物SPF級SD大鼠60只，28～30d齡，體質(zhì)量(250±10)g，雌雄各半。由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供(許可證號:粵監(jiān)證字2008D006，批號：0037766)。

12實驗藥品亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile，IDPN)購自Alfa Aesar公司(批號：C7323A)，中藥益智寧神口服液(由廣東省中醫(yī)院提供，批號：080201)，對照藥物為氟哌啶醇(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，批號：08031121)。

13儀器及試劑LC26A 型高效液相色譜儀、SPD26AV 熒光檢測器、C2R4A 數(shù)據(jù)處理機均為日本島津公司產(chǎn)品，脫水機、包埋機、切片機和生物顯微鏡等設(shè)備為德國Leica公司產(chǎn)品，微量組織勻漿器為Millipore公司產(chǎn)品，ZH藍(lán)星C/s型腦立體定位儀，高氯酸、乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2)均為分析純，甲醇為色譜純，對照品由中國藥品生物制品所提供。

14模型復(fù)制參考Wakata[3]的方法，將亞氨基二丙腈溶解于生理鹽水，稀釋成濃度100mg/mL，給藥途徑為腹腔注射，劑量為150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。

15分組及給藥選用SD大鼠隨機分為4組：空白組和模型組各10只，中藥組和西藥組各20只，每組均雌雄各半。治療組在造模后第2天開始給藥，中藥組按20kg的兒童每天口服20mL益智寧神口服液的比例計算，每只大鼠灌胃約2mL/d;西藥組按20kg的兒童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例計算，每只大鼠灌胃約015mg/d，連續(xù)14d。

16大鼠行為觀察[4]采用觀察評分，每次至少觀察1h，主要誘發(fā)癥狀為運動行為和刻板運動。(1)運動行為評分：0分：安靜或正?；顒?1分：能過度興奮;2分：探究行為增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板運動(或定型運動)評分：0分：無刻板運動;1分：旋轉(zhuǎn)行為;2分：頭和頸部的上下運動過多;3分：頭、頸部的上下運動過多加旋轉(zhuǎn)行為;4分：頭向側(cè)擺合并頭和頸部的上下運動過多。

17神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測[5]第14天將所有實驗大鼠迅速斷頭處死，借助腦立體定位儀，取右腦海馬組織及邊緣系統(tǒng)(包括紋狀體、隔核、層殼核、基底節(jié)、齒狀回)，精確稱質(zhì)量，置入1mL處理液(含01mol/L高氯酸和05g/LEDTANa2)中，微量組織勻漿器冰溶下勻漿，4℃冰凍離心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色譜法測定多巴胺(DA)和去甲腎上腺素(NE)濃度。測樣時，室溫下解凍，進(jìn)樣20μL，以峰面積外標(biāo)法定量。

18統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS130和SAS913版本進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理和分析，各組神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測數(shù)據(jù)分別進(jìn)行方差齊性和正態(tài)分布檢驗，方差不齊采用秩和檢驗，檢驗水平α=005。

2結(jié)果

21各組行為學(xué)觀察和評分各組治療前后運動行為和刻板運動積分見表1。模型組行為學(xué)評分與空白組比較，差異有顯著性意義(P

治療14d后，中、西藥組運動行為積分和刻板運動積分降低，與模型組比較差異有顯著性意義(P

22各組治療前后腦組織DA、NE含量變化比較表2結(jié)果顯示：模型組腦組織DA水平降低，NE水平升高，與空白組比較差異均有顯著性意義(P

3討論

IDPN是一種中樞神經(jīng)毒素，50年代以后就用于神經(jīng)病理學(xué)的研究，本研究參考Wakata[3]的方法復(fù)制模型，從神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)兩方面觀察藥物治療對TS模型動物臨床行為學(xué)典型特征的影響。IDPN誘發(fā)TS模型大鼠出現(xiàn)明顯刻板運動和運動行為異常，如過度興奮、探究行為、異常跑跳、旋轉(zhuǎn)行為和頭頸部上下側(cè)擺等動作均具有TS臨床行為學(xué)的典型特征，有時出現(xiàn)連續(xù)的嗤鼻、抬舉上肢等動作，類似于人類TS患兒喉部發(fā)聲、聳肩等特征行為。本研究通過對藥物治療前后TS模型大鼠運動行為和刻板運動行為評分的比較，發(fā)現(xiàn)中藥組在改善動物TS典型特征行為方面效果明顯，如頭部、頸部的抽動減輕，旋轉(zhuǎn)行為明顯緩解，每次異常行為發(fā)作持續(xù)時間縮短，異常抽動次數(shù)消失，異常跑動及不規(guī)律的彈跳運動明顯減少。

雖然目前對TS的神經(jīng)生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)還未完全闡明，但基本認(rèn)為中樞神經(jīng)遞質(zhì)，特別是DA、NE、5-羥色胺(5HT)等與TS之間關(guān)系密切[5]，因此，探討大腦多巴胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平是證明藥物神經(jīng)生物學(xué)療效的主要依據(jù)。本研究對大腦海馬區(qū)DA和NE水平進(jìn)行測定，結(jié)果表明：治療后中藥組DA水平明顯升高，而NE水平有所下降，均趨向于正常水平。與TS有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)包括乙酰膽堿、腎上腺素、5HT、多巴胺等，主要分布于紋狀體、隔區(qū)、藍(lán)斑、黑質(zhì)等海馬、基底前腦及邊緣系統(tǒng)，構(gòu)成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[6-8]。有關(guān)藥物治療對大腦組織不同部位和核團(tuán)神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響文獻(xiàn)報道并不一致，而且與檢測時間點有很大關(guān)系[8]。本研究結(jié)果初步表明，中藥治療14d后，對大腦組織DA和NE兩種神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化產(chǎn)生顯著影響，對于治療過程中以及停藥后神經(jīng)遞質(zhì)的動態(tài)變化仍需進(jìn)一步觀察。

益智寧神口服液的主要組成為：熟地黃、黃芪、白芍、龍骨、遠(yuǎn)志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微溫，入心、肝、腎經(jīng)，本品味厚氣薄，為補血生精、滋陰補腎之要藥，《珍珠囊》曰：“主補血氣，滋腎水，益真陰”。黃芪，味甘，性微溫，入脾、肺經(jīng)，質(zhì)輕升浮，為升陽補氣之圣藥?？裳a中氣、益元氣、溫三焦、壯脾陽，選以補脾益氣。白芍味苦、酸，性微寒，入肝經(jīng)，既能養(yǎng)血斂陰，又能平抑肝陽，還能柔肝止痙;而龍骨味甘、澀，性微寒，入心、肝經(jīng)，專攻平肝潛陽、鎮(zhèn)靜安神之用，兩者搭配，養(yǎng)陰寧心，平肝潛陽。五味子性溫，五味具備，酸能收斂，苦能清熱，咸能滋腎，溫而不燥，既能益氣生津，補腎養(yǎng)心，用其養(yǎng)心滋腎安神;遠(yuǎn)志、石菖蒲有安神益智、化痰開竅之功效。諸藥配伍，具有健脾滋腎、平肝熄風(fēng)、寧神益智、化痰開竅之功效。氟哌啶醇是目前治療TS的最有效藥物之一[9]，療效確切，但因副作用明顯使其臨床應(yīng)用受到限制，通過實驗結(jié)合臨床用藥發(fā)現(xiàn)，益智寧神口服液的療效與氟哌啶醇無明顯差異，且療效更加穩(wěn)定，易為患兒及家屬接受。

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篇5

摘要：認(rèn)知習(xí)性學(xué)作為一種新生之物，是指對非人類動物的思維過程、意識、信念或者理性的進(jìn)化和比較研究。本文對認(rèn)知習(xí)性學(xué)的概念和研究方法進(jìn)行辨析，并介紹三種針對認(rèn)知習(xí)性學(xué)的態(tài)度，最后對社會性游戲方面研究內(nèi)容進(jìn)行具體介紹。

關(guān)鍵詞：認(rèn)知習(xí)性學(xué)；研究方法；態(tài)度；社會性游戲

心理學(xué)研究正在走向新的綜合之路，認(rèn)知習(xí)性學(xué)就是這樣一種新生之物，有的說它是認(rèn)知心理學(xué)和習(xí)性學(xué)的綜合研究。在認(rèn)知習(xí)性學(xué)中，人們通過對動物行為的研究，還能加深人類對自己行為和心理的認(rèn)識。

一、認(rèn)知習(xí)性學(xué)的涵義

認(rèn)知習(xí)性學(xué)（Cognitive Ethology）被廣泛地定義為對非人類動物的思維過程、意識、信念或者理性的進(jìn)化和比較研究，該領(lǐng)域的研究依靠各種不同類型的調(diào)查和解釋方式進(jìn)行。這是一個迅速發(fā)展的研究領(lǐng)域，吸引了大量的來自各學(xué)科的研究者的注意。筆者認(rèn)為它主要是圍繞“動物行為過程中是否有意識”以及“怎樣研究動物意識”來展開的。

二、認(rèn)知習(xí)性學(xué)的研究方法

認(rèn)知習(xí)性學(xué)中也像習(xí)性學(xué)一樣強調(diào)自然主義的觀察，因為行為能力是在對自然選擇的壓力做出反應(yīng)的過程中進(jìn)化的，所以認(rèn)知習(xí)性學(xué)家偏好在盡可能接近自然選擇發(fā)生時的自然環(huán)境的情境下對動物進(jìn)行觀察和實驗；因為認(rèn)知習(xí)性學(xué)是一門比較科學(xué)，所以認(rèn)知習(xí)性學(xué)的研究強調(diào)廣闊的分類學(xué)的比較，且不把關(guān)注點放在有限分類中一些選擇的代表上。此外將動物行為的研究定位于進(jìn)化和比較的框架之中，認(rèn)知習(xí)性學(xué)家堅持認(rèn)為動物的現(xiàn)場研究（包括細(xì)致的觀察和實驗研究）可以為動物認(rèn)知研究提供信息。認(rèn)知習(xí)性學(xué)并不一定需要將動物的行為研究帶入實驗室中進(jìn)行研究，以讓人信服（此處是說明不是只有實驗研究才是科學(xué)的，現(xiàn)場研究也是有效地）。

因此，與認(rèn)知習(xí)性學(xué)家相對比而言，認(rèn)知心理學(xué)家主要致力于實驗設(shè)置的相關(guān)主題的研究，并不強調(diào)動物認(rèn)知的進(jìn)化或比較方面。當(dāng)認(rèn)知心理學(xué)家的確采用了跨種系比較，他們主要感興趣的是以普遍潛在機制的形式來解釋不同的行為模式；習(xí)性學(xué)家，和其他生物學(xué)家一樣，通常更關(guān)注生物體已尋找到的對共同問題的解決方式的多樣性。

三、認(rèn)知習(xí)性學(xué)作為一門科學(xué)面臨的三種態(tài)度

對于認(rèn)知習(xí)性學(xué)而言，主要問題是以數(shù)據(jù)收集的方法、分析、描述、解釋和對動物行為的解釋為中心。因為認(rèn)知習(xí)性學(xué)論述動物思維和心理狀態(tài)，所以對其研究的可能性有不同的看法，爭論認(rèn)知習(xí)性學(xué)是否是一門科學(xué)，甚至是否可能是一門科學(xué)。這三種不同態(tài)度分別為否認(rèn)論、懷疑論、支持論。筆者認(rèn)為，三種對認(rèn)知習(xí)性學(xué)的態(tài)度差異部分是由于所認(rèn)同的科學(xué)研究方法不同造成的。

否認(rèn)論者否認(rèn)認(rèn)知行為學(xué)的任何成功的可能性。他們挑選最困難最少接觸的現(xiàn)象進(jìn)行研究，然后得出結(jié)論我們關(guān)于這個主題只能得到非常少量的具體信息，并且也不可能在其他方面做的更好。他們否認(rèn)認(rèn)知解釋、認(rèn)知假設(shè)。提倡實驗室研究。

懷疑論者很難分類，他們比否定論者稍微開放點，而且他們之間的觀點差異非常大。他們承認(rèn)認(rèn)知習(xí)性學(xué)的部分成功，對未來持一定樂觀態(tài)度。很多懷疑論者熱衷于神經(jīng)學(xué)，認(rèn)為懂得神經(jīng)系統(tǒng)后會使認(rèn)知習(xí)性學(xué)顯得多余（Griffin，1992年，也對神經(jīng)學(xué)很感興趣，但他不擔(dān)心神經(jīng)生物學(xué)會導(dǎo)致認(rèn)知習(xí)性學(xué)的消失）。他們有時也把困難和可能性混為一談，但是當(dāng)發(fā)現(xiàn)有價值的東西時就會停止懷疑，他們對民俗心理學(xué)、神論學(xué)、軼事和認(rèn)知解釋的態(tài)度也不是絕對的拒絕。

支持者對于動物認(rèn)知和認(rèn)知習(xí)性學(xué)調(diào)查持開放的觀點。他們認(rèn)為在這方面的研究已經(jīng)取得了一些成功，認(rèn)知行為學(xué)的研究取向給我們提供了一些新的有趣的數(shù)據(jù)。他們肯定田野研究以及對比較習(xí)性學(xué)和進(jìn)化論的依賴對認(rèn)知習(xí)性學(xué)做出的貢獻(xiàn)。支持者們也接受民俗心理學(xué)，用它做一些保守的研究。他們還接受運用認(rèn)知學(xué)解釋建立一個系統(tǒng)的解釋性框架，并且認(rèn)為軼事和擬人化理論有可取之處。雖然支持者們承認(rèn)Griffin對于實驗研究沒有做出具體詳細(xì)建議，但這并不能阻止他們尋求像 Griffin的嚴(yán)格經(jīng)驗法一樣的可行的方法。支持者是批判性的，但他們也是耐心的，他們不想過早的毀滅這一研究領(lǐng)域。Griffin認(rèn)為我們可以通過認(rèn)真學(xué)習(xí)溝通和其他行為模式來探悉動物的想法。

四、認(rèn)知習(xí)性學(xué)的研究內(nèi)容――社會性游戲方面

社會性游戲是認(rèn)知研究的熱點問題，并且對否定論、懷疑論者和支持者都構(gòu)成挑戰(zhàn)，游戲比其他研究領(lǐng)域更能提供動物思維的證據(jù)。當(dāng)動物們在游戲時，他們主要運用動作模式，這些模式也用于捕食行為、反捕食行為和求偶行為中。這樣，人們也質(zhì)疑社會性游戲行為如果不用認(rèn)知詞匯是不能被研究的。例如，如果你很少被告知Jethro和Henrietta在做一些動作且這些動作描述得很客觀，你不會知道他們正在玩游戲，也不知道他們玩的很高興；因為你不知道那些事情主要由一些也用于其他活動中的動作模式組成。個體需要能夠和潛在的游戲伙伴交流，那些伙伴是它不準(zhǔn)備統(tǒng)治的、吃的、與他們的。甚至，他打算與他們玩游戲。對參與社會性游戲的動物的行為觀察顯示，他們希望并且相信只要他們清晰地用某種信號來交流表達(dá)他們的游戲意愿，他們對誰會對他們的意圖有反應(yīng)的想法會被別的個體認(rèn)識到。在此觀點看來，游戲被看做一項合作事業(yè)。

五、結(jié)語

總而言之，認(rèn)知習(xí)性學(xué)作為一個新研究領(lǐng)域前景還是比較樂觀的，我們應(yīng)該有耐心待其成長。對于那些否定者的哲學(xué)家們，習(xí)性學(xué)家需要更明確的讓他們知道我們已經(jīng)知道了什么，我們將做什么，以及怎樣進(jìn)行研究，盡管哲學(xué)家們不能提出方案，但是也可以適當(dāng)采納他們對實驗設(shè)計的現(xiàn)實建議，這同時也能夠讓哲學(xué)家們了解認(rèn)知習(xí)性學(xué)到底是怎么一回事。此外，現(xiàn)場研究的方法是可取的，要正確看待民俗心理學(xué)和神經(jīng)科學(xué)以及其他資料對認(rèn)知習(xí)性學(xué)的作用。認(rèn)知習(xí)性學(xué)家還需要不斷給這一領(lǐng)域帶來有挑戰(zhàn)性的問題并攻克他們。

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篇6

關(guān)鍵詞:運動生理學(xué);運動醫(yī)學(xué);慢性應(yīng)激抑郁模型;行為學(xué);體重;動物實驗

中圖分類號:G804.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1006-7116(2010)11-0100-06

Effects of exercising on the ethological expressions and body weight of

chronic stress induced depression model rats

WEI Hong-wen1,JIAO Wei1,ZHANG You-zhi2,ZHAO Nan2,XUE Rui2

(1.Sports Rehabilitation Depatrment,Beijing Sport University,Beijing 100084,China;2.Institute of

Pharmacology and Toxicology,Academy of Military Medical Sciencet,Beijing 100850,China)

Abstract: In order to observe the effects of exercising on the ethological expressions and body weight of chronic stress induced depression model rats, the authors replicated depression model rats by means of chronic unpredictable stress (CUS), used fluoxetine (Flu, a classical antidepressant) as a control, observed the effects of medium intensity treadmill running (MIR) and low intensity treadmill running (LIR) on the ethological expressions and body weight of depression model rats in chocolate milk anhedonia experiment, start experiment and novelty inhibition ingestion experiment, and revealed the following findings: 1) ethological study: CUS could significantly lower the degree of addiction of the rats to chocolate milk, reduce their spontaneous activity, and prolong their ingestion latent period in a novel environment; fluoxetine could significant counteract the said changes; with the continuance of exercising, chronic stress had fluoxetine consistent anti depression like behavior functions; 2) body weight change: CUS significantly inhibited the increase of body weight of the rats, Flu, Flu+MIR and Flu+LIR were all unable to improve the slow increase of body weight of CUS rats; MIR and LIR can improve the condition of slow increase of body weight of CUS rats; their weekly body weight had no significant difference as compared with the rats in the CUS group. The said findings proved the followings: depression model rats showed body symptoms of slow body weight increase and depression like ethological expressions such as anhedonia, spontaneous activity slowdown and ingestion latent period prolongation; exercising has fluoxetine consistent anti depression ethological effects on CUS rats.

Key words: sports psychology;sports medicine;chronic stress induced depression model;ethology;body weight;animal experiment

抑郁癥(depression)屬于情感性精神障礙(mood disorders),是一種以明顯而持久的心境低落為主要特征的綜合征,其高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率和高自殺率對社會造成了極大危害。世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)計,到2020年,抑郁癥將在全球疾病負(fù)擔(dān)排名中居第2位[1]。目前治療抑郁癥的藥物普遍起效較慢,有效率也只有60%~70%,且部分難治性抑郁癥更是目前治療的難點[2]。

研究顯示,抑郁癥發(fā)生與長期缺乏健身鍛煉有關(guān),不參加運動本身就是導(dǎo)致抑郁癥的重要因素[3]。經(jīng)常從事體力活動的人患精神疾病的比率明顯低于很少進(jìn)行體力活動的人[4]。近年來臨床在治療精神類疾病的過程中發(fā)現(xiàn),運動療法用于精神疾病和腦疾病的治療與康復(fù)顯現(xiàn)出良好的效果[5],而且運動與抗抑郁病藥物相結(jié)合對治療抑郁病比單一藥物療法有效[6-7]。但這些研究仍停留在一般的問卷調(diào)查或診療觀察上,缺乏運動抗抑郁作用的機制研究。

慢性不可預(yù)知性應(yīng)激(Chronic Unpredictable Stress,CUS)是近年來國內(nèi)外應(yīng)用最為廣泛的抑郁動物模型之一,它可模擬抑郁的核心癥狀――缺乏(anhedonia),目前被廣泛運用于抑郁癥的病理生理機制、抗抑郁藥物研發(fā)及作用機制的研究[8]。本研究通過復(fù)制CUS大鼠模型,觀察運動對CUS模型大鼠行為學(xué)表現(xiàn)和體重的影響,以經(jīng)典抗抑郁劑氟西汀(Fluoxetine,Flu)作為對照,旨在探討運動的抗抑郁樣的作用。

1材料與方法

1.1實驗動物

65只成年SD雄性大鼠,SPF級,購入時體重150~160 g,購自維通利華實驗動物有限公司,許可證編號:SCXK(京)2007-0001。大鼠每籠4只群養(yǎng),自由攝食飲水,室溫22~24℃,相對濕度(50±10)%,自然晝夜節(jié)律光照。

1.2主要儀器設(shè)備

DSPT-202動物跑臺(杭州段氏,中國),VIDEOMEX-V 圖像運動解析系統(tǒng)(Columbus Instruments,美國),大鼠穿梭箱反應(yīng)儀(Med Associate,美國),噪聲儀(中國)。

1.3實驗設(shè)計

1)實驗流程。

大鼠購入后安靜飼養(yǎng)3 d后,進(jìn)行1周跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練,接著進(jìn)行為期4周的慢性不可預(yù)知性應(yīng)激。期間針對不同的組別,分別伴隨給予氟西汀、跑臺訓(xùn)練干預(yù)措施,每周測定體重,并在慢性應(yīng)激結(jié)束后進(jìn)行開場實驗[9]、巧克力牛奶缺失實驗[10]、新奇抑制攝食實驗[11]。

2)動物篩選及分組。

適應(yīng)性跑臺訓(xùn)練負(fù)荷安排:坡度=0,跑速=5~10~15 m/min,10~15~20 min/次,1次/d×6 d。訓(xùn)練期間不使用電擊裝置驅(qū)趕大鼠,以避免對大鼠施加不良應(yīng)激[11]。

將篩選出來的大鼠,根據(jù)體重均衡分為7組,每組8只。各組之間體重差異沒有顯著性(P>0.05)。各組具體情況見表1。

3)大鼠慢性應(yīng)激模型的建立。

參考文獻(xiàn)[9,11,13]方法,并盡量使應(yīng)激程序符合不可預(yù)知性的特點,連續(xù)4周每天下午時間給予大鼠采用1~2種如下刺激:禁食24 h、禁水24 h、潮濕飼養(yǎng)(200 mL水加150 g墊料)+孤養(yǎng)24 h、鼠籠45°傾斜24 h、夾尾1 min、電擊(0.8 mA,電擊每分鐘間隔15 s,共30 min)、通宵照明12 h、白噪音(110 dB)1 h、10℃冰水游泳6 min、制動1~2 h。

4)藥物干預(yù)。

Flu組、Flu+LIR組、Flu+MIR組每次應(yīng)激前1 h給予氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride,批號000530,白色粉末,純度>99%,由常州第四制藥廠惠贈),灌胃給藥(10 mg/kg),給藥體積2 mL/kg,1次/d。其余組大鼠灌胃給予相應(yīng)體積的生理鹽水。

5)跑臺訓(xùn)練。

每天08:30~12:30進(jìn)行跑臺運動。具體訓(xùn)練負(fù)荷安排見表2。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)以“平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差”( s)表示。統(tǒng)計分析用Windows SAS 6.12軟件完成。SAS引導(dǎo)程序引自文獻(xiàn)[14]。

2結(jié)果及分析

2.1跑臺訓(xùn)練篩選情況

大約至少有10%的大鼠天生不會跑動或者不愿意跑動[12]。所以,在大鼠購入后安靜飼養(yǎng)3 d后進(jìn)行1周的跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練,剔除了9只不愿意跑動的大鼠。

2.2巧克力牛奶缺失實驗

由于液體攝入量與體重大小有關(guān),所以各液體攝入量以每kg體重計算。實驗日從2000開始進(jìn)行測試,測定2 h內(nèi)大鼠攝入液體的相對質(zhì)量。結(jié)果顯示(表3):各組大鼠液體攝入總量沒有顯著性差異(P>0.05);除CUS組外,其他各組大鼠巧克力牛奶攝入量均顯著多于水?dāng)z入量(P

2.3自發(fā)活動

將大鼠放入不同于飼養(yǎng)環(huán)境的新環(huán)境時,首先表現(xiàn)為對新異環(huán)境的探究行為,經(jīng)過l5 s對新異環(huán)境的適應(yīng)和熟悉,然后開始自發(fā)活動測試。

采用Videomex-V圖像運動解析系統(tǒng)測定大鼠自發(fā)活動,結(jié)果顯示(見表4),與Control組相比,CUS組大鼠自發(fā)活動減少,表現(xiàn)為測定時間內(nèi)的活動總路程顯著減少(P

2.4攝食潛伏期

結(jié)果顯示(見表4),與Control相比,CUS組大鼠在新奇環(huán)境中的攝食潛伏期明顯延長(P

2.5體重

結(jié)果顯示(見表5):CUS開始前各組大鼠體重差異無顯著性(P>0.05),符合實驗的基本要求。慢性應(yīng)激對大鼠體重有明顯影響,CUS組大鼠在2周后體重開始顯著低于Control組(P

3討論

在應(yīng)激致抑郁的動物模型中,開場實驗、糖水消耗量、體重變化是經(jīng)典的反映動物抑郁行為學(xué)及軀體癥狀的指標(biāo)[14]。根據(jù)文獻(xiàn),并結(jié)合本實驗室的以往研究成果[9,11,13]和實驗條件,本研究選取巧克力牛奶缺乏實驗、開場實驗、新奇抑制攝食實驗這3個行為學(xué)測驗,結(jié)合大鼠體重的變化,來綜合評價造模的效果。

3.1巧克力牛奶缺乏實驗

CUS抑郁模型腦內(nèi)獎賞系統(tǒng)一些神經(jīng)元結(jié)構(gòu)受損,導(dǎo)致快樂體驗?zāi)芰Φ娜狈15]。動物對甜覺獎賞的反應(yīng)性下降是最簡單、最易于觀察的指標(biāo),因此目前國外大多數(shù)學(xué)者采用液體消耗實驗中糖水消耗量和糖水偏愛百分比來作為測量缺乏的有效客觀指標(biāo)[8-9,11,13,15],也有研究用巧克力牛奶缺乏實驗(chocolate milk anhedonia test,CMAT)[10]、甜味食物攝取量(sweet food intake)或甜味食物攝取比值(rate of sweet food intake)、美味食物攝取(palatable food intake)、顱內(nèi)自我刺激(brain stimulation reward)、位置偏愛實驗(place preference conditioning procedure)等實驗來測量[16]。

傳統(tǒng)的糖水消耗實驗由于存在許多繁瑣的步驟[8],如:需要進(jìn)行糖水基線訓(xùn)練和測試,大約有10%~15%的動物不能獲得穩(wěn)定的糖水?dāng)z入基線,而且還有同樣比例的應(yīng)激動物經(jīng)過3周應(yīng)激后糖水?dāng)z入量并沒有清晰和穩(wěn)定的減少,這些動物需要淘汰;在實驗時要進(jìn)行控制飲食等復(fù)雜的工作。還有文獻(xiàn)報道,大鼠糖水?dāng)z入量(或糖水偏嗜度)在慢性應(yīng)激后沒有下降,有的抗抑郁藥也不能恢復(fù)慢性應(yīng)激動物下降的糖水?dāng)z入量[17]。盡管上述局限性可能與研究者所采用的動物品系、應(yīng)激程序和糖水實驗方法的不同有關(guān),但從另一方面提示了糖水消耗實驗的方法不夠穩(wěn)定和敏感,這在很大程度上限制了該實驗在抑郁癥研究領(lǐng)域的應(yīng)用。

CMAT是另外一種反映動物缺乏的實驗,該方法不需要事先進(jìn)行液體消耗的訓(xùn)練,只需要進(jìn)行一次性測試,具有快速、簡便的特點[10]。

本研究結(jié)果表明,在液體攝入總量沒有差異的情況下,CUS大鼠攝入了較多的水,而Control組大鼠攝入了較多的巧克力牛奶,相對于Control組大鼠而言,CUS組大鼠對對巧克力牛奶“沒有興趣”,提示其出現(xiàn)了“缺乏”。大鼠巧克力牛奶飲用量的下降不能單純地解釋為液體飲用的下降(即渴覺的下降),因為動物總液體消耗量并無明顯改變,而巧克力牛奶攝入量、巧克力牛奶偏嗜度顯著下降,提示本研究的CUS模型表現(xiàn)出了動物對幸福事件反應(yīng)能力的下降。

結(jié)果還表明,CUS伴隨給予氟西汀,進(jìn)行中、小強度運動跑臺訓(xùn)練,以及氟西汀分別聯(lián)合中、小強度運動跑臺訓(xùn)練,均能夠顯著提升CUS大鼠對巧克力牛奶的“興趣”,“缺乏”顯著減少。表明CUS大鼠出現(xiàn)了抑郁癥的核心癥狀――缺乏,而運動、氟西汀均能夠改善此核心癥狀。

3.2開場實驗

本實驗采用Videomex-V圖像運動解析系統(tǒng)測定動物的自發(fā)活動(spontaneous motor activity),該系統(tǒng)能夠自動識別動物的運動軌跡,減少了實驗工作量,更重要的是提高了實驗數(shù)據(jù)的精度和可靠性。結(jié)果顯示,CUS使大鼠自發(fā)活動減少,表現(xiàn)為測定時間內(nèi)的活動總路程顯著減少,與本研究室[8,10,12]以及國外文獻(xiàn)報道一致[17]。CUS伴隨給予氟西汀、進(jìn)行中等強度跑臺訓(xùn)練、氟西汀分別聯(lián)合中、小強度跑臺訓(xùn)練均能夠顯著增加CUS大鼠活動距離。表明跑臺運動能夠使CUS大鼠維持一定的自發(fā)活動,減少抑郁樣行為。

3.3新奇抑制攝食實驗

新奇抑制攝食實驗(novelty-suppressed feeding,NSF)是動物禁食后在饑餓狀態(tài)下新奇的環(huán)境中產(chǎn)生攝食和對新環(huán)境恐懼的矛盾沖突,長期給予抗抑郁藥物可使動物的沖突反應(yīng)降低,表現(xiàn)為開始攝食的潛伏期縮短,該模型目前被廣泛應(yīng)用于抗抑郁劑以及抗焦慮藥物的長期效應(yīng)評價[11]。

本研究結(jié)果表明,與Control相比,CUS組大鼠在新奇環(huán)境中的攝食潛伏期明顯延長,慢性應(yīng)激伴隨給予氟西汀能夠顯著縮短CUS大鼠攝食潛伏期,這與本研究室以往研究結(jié)果[9,11]一致。

運動對NSF實驗影響的報道較少。自由轉(zhuǎn)輪運動顯著縮短了正常小鼠攝食潛伏期,但對LID小鼠(一種以血清IGF-1較低為特點的突變小鼠)攝食潛伏期沒有顯著影響[19]。目前尚未見運動對CUS大鼠NSF影響的文獻(xiàn)。

本研究顯示,CUS伴隨進(jìn)行中、小強度跑臺訓(xùn)練,氟西汀分別聯(lián)合中、小強度跑臺訓(xùn)練,均能夠顯著縮短CUS大鼠攝食潛伏期。表明運動,以及抗抑郁藥聯(lián)合運動,均能夠縮短抑郁模型大鼠攝食潛伏期,運動在該模型上顯示出較好的抗抑郁樣作用,而且運動進(jìn)一步加強了氟西汀在新奇抑制攝食模型上的抗抑郁作用。

3.4體重

體重的變化可以看作是抑郁大鼠模型量化的軀體癥狀和體征,抑郁大鼠體重增長緩慢,這與抑郁癥患者的食欲降低、消瘦相類似[8]。

本研究對大鼠每周測定一次體重,結(jié)果發(fā)現(xiàn),CUS對大鼠體重有明顯影響,CUS組大鼠在2周后體重開始顯著低于Control組,并且一直延續(xù)到慢性應(yīng)激的第3周和第4周;慢性應(yīng)激伴隨給予氟西汀,未能改善CUS大鼠體重的增長緩慢,表現(xiàn)為從慢性應(yīng)激2周后開始到慢性應(yīng)激結(jié)束后,每周體重均顯著低于CUS組;CUS伴隨進(jìn)行中、小等強度跑臺運動,能夠改善CUS大鼠體重增長緩慢的情況,而且對抗CUS抑制體重增長的情況優(yōu)于慢性應(yīng)激伴隨給予氟西汀,表現(xiàn)為LIR組、MIR組與CUS組相比,在整個實驗期體重差異均沒有顯著性,LIR組體重在4周后,MIR組在3周、4周后體重還顯著高于Flu組;CUS伴隨給予氟西汀并分別聯(lián)合中、小強度跑臺訓(xùn)練,也未能明顯改善CUS大鼠體重增長緩慢的情況,表現(xiàn)為從慢性應(yīng)激2周后開始到慢性應(yīng)激結(jié)束后,每周體重均顯著低于CUS組;Flu+LIR組、Flu+MIR組在慢性應(yīng)激3周后開始到慢性應(yīng)激結(jié)束,體重均分別顯著低于LIR組、MIR組。

由于本實驗對大鼠進(jìn)行群養(yǎng)(4只/籠),群養(yǎng)大鼠進(jìn)食過程中經(jīng)常有食料遺撒現(xiàn)象,而且慢性應(yīng)激程序中有禁食、禁水的項目,故無法精確計量每只大鼠的進(jìn)食量。因此,慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠體重增長緩慢,本研究分析可能與HPA軸有關(guān):下丘腦分泌的CHR不但可以刺激垂體釋放ACTH,而且是調(diào)節(jié)能量平衡和體重的重要因子。慢性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠體重增長緩慢,可能是HPA軸被激活,下丘腦分泌的CHR引起食欲減退,以及在應(yīng)激條件下能量消耗增加,兩種因素雙重作用的結(jié)果[20]。而慢性應(yīng)激伴隨給予氟西汀進(jìn)一步降低大鼠體重的原因,與氟西汀的藥理作用有關(guān)。氟西汀屬于擇性5-HT再攝取抑制劑,其主要藥理作用在于選擇性地抑制CNS突觸前細(xì)胞對5-HT的再攝取,可以通過增加大腦自身的5-HT供給來糾正這種神經(jīng)遞質(zhì)的缺乏,從而能夠有效控制抑郁癥的癥狀。動物實驗表明增加突觸間隙5-HT或直接刺激5-HT2C受體可減少進(jìn)食,反之則增加進(jìn)食[21]。因此,氟西汀通過升高突觸間隙的5-HT水平,減少了大鼠的進(jìn)食,進(jìn)而導(dǎo)致體重下降。

我們也發(fā)現(xiàn)與本研究結(jié)果類似的報道[11,22],即:抗抑郁藥物能夠有效改善甚至逆轉(zhuǎn)CUS大鼠抑郁樣行為,但是不能改善其體重的緩慢增長。因此,我們存在這樣的疑惑:盡管抑郁模型大鼠表現(xiàn)出體重增長幅度減少或體重下降已經(jīng)得到許多研究的驗證,但是當(dāng)氟西汀能夠有效改善抑郁模型大鼠的行為學(xué)異常時,為何不能逆轉(zhuǎn)其體重下降?是因為本研究的大鼠在總共為期5周(1周適應(yīng)期,4周慢性應(yīng)激期)的實驗后(已達(dá)10周齡)已錯過了生長發(fā)育的最佳時期,慢性應(yīng)激對其生長發(fā)育造成不可逆的抑制,從而使抗抑郁藥物不能恢復(fù)其體重增長,還是抗抑郁藥物在發(fā)揮抗抑郁作用的同時,也作用于神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的某個靶點,對大鼠體重增長產(chǎn)生抑制作用?這有待于后續(xù)工作的深入研究。

本研究結(jié)果還說明,慢性應(yīng)激伴隨進(jìn)行跑臺訓(xùn)練,對于大鼠體重增長緩慢有一定的改善作用,對于保持動物的體重有一定的效益。原因可能是適量運動部分平衡了HPA軸的功能,還有可能是運動促進(jìn)機體新陳代謝,增加了大鼠的食欲,后者引起體重的增長。這有待于今后進(jìn)一步的驗證。

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篇7

【摘要】 目的觀察和血益智方對 VD 大 鼠行為學(xué)和形態(tài)學(xué)的影響。方法動物隨機分為假手術(shù)組和模型組。VD 模型制作成功后隨機分為和血益智方小劑量組和大劑量組、思爾明組、生理鹽水（NS）組。用穿梭箱和水迷宮檢測大鼠行為學(xué)并作海馬 HE 常規(guī)染色，光鏡觀察。結(jié)果和血益智方、思爾明均能縮短VD 大鼠穿梭箱實驗主動逃避時間和遭受電擊時間，減少遭受電擊次數(shù)；能縮短 VD 大鼠水迷宮實驗時定位航行潛伏期、游泳的路徑，增加大鼠空間探索實驗中穿越原目標(biāo)的次數(shù)。NS 組海馬細(xì)胞體積變大、核變小、有核仁消失和核固縮；除 假手術(shù)組正常外，其余各組海馬細(xì)胞層次有減少，但細(xì)胞排列比較密集、細(xì)胞形態(tài)尚可。結(jié)論 和血益智方可 改善 VD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

【關(guān)鍵詞】 血管性癡呆；MORRIS 水迷宮；學(xué)習(xí)記憶；海馬

〔Abstract〕 Objective

To study the effects of Hexue Yizhi Formula on learning and memory and the morphology of the hippocampal neurons of the rats with Vascular Dementia (VD).

Methods

The rats were subjected for ischemia-reperfusion repeatedly by blocking the bilateral common carotid arteries to establish VD models. They were pided into four groups randomly after the establishment of VD model. The treating groups were administrated with Hexue Yizhi Formula (1 mL/100 g)、Hexue Yizhi Formula (2 mL/100 g)、 Sermion、Natural Salt Solution (NS) respectively. Animals with the shamed-operation were taken as control. The behavior changes were observed through the Shuttle box test and water maze test at the end of treatment.

Results

In shuttle box test Stimulus Frequency (SC) 、Stimulated Time (ST) and Active avoidance Response Time (ART) of the rats were reduced respectively in Sermion、Hexue Yizhi Formula (1 mL/100 g)、Hexue Yizhi Formula (2 mL/100 g) groups than those in NS group. In the Morris water maze test， Stage of Latency and Pathway were declined and the times were increased markedly acrossing the target. The structure levels of hippocampal neurons reduced， but cells were more normal and intensive in treated groups except NS group.

Conclusion

Our study suggest that Hexue Yizhi Formula can improve the ability of the leaning and memory of the rats with vacular dementia and improve the clinical symptoms of VD.

〔Key Words〕

Vascular dementia; Morris water maze; Learning and memory; Hippocampus

血管性癡呆（vascular dementia， VD）是老年人多發(fā)癡呆之一，系繼發(fā)于腦血管病變后的緩慢性、漸進(jìn)性智能障礙。它不僅給患者帶來軀體上的痛苦，也帶來精神上的巨大負(fù)擔(dān)。湖北中醫(yī)學(xué)院名老中醫(yī)田玉美教授用和血益智方治療 VD 有較好的臨床療效。本實驗從行為學(xué)和形態(tài)學(xué)方面研究了和血益智方抗大鼠 VD 的作用，現(xiàn)報道如下。

1

材料和方法

1.1

動物及分組

經(jīng)穿梭箱實驗篩選的健康正常 SD 大鼠，體重220~250 g，雄性，隨機分為假手術(shù)組（10 只）和模型組。將造模成功的 VD 大鼠 40 只隨機分為 HXYZ 組 1（和血益智方小劑量）、HXYZ 組 2（和血益智方大劑量）、思爾明（Sermion）組、生理鹽水（NS）組，每組各 10 只。所用大鼠均由湖北省實驗動物中心提供〔SPF 級，動物合格證號 SCXK（鄂）2003-0003〕。各組大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2

試劑及器材

Sermion（普強蘇州制藥有限公司，批號為0302005）、染發(fā)劑（貂油黑發(fā)霜，廣東順德市現(xiàn)代保健用品有限公司）。

和血益智方含當(dāng)歸、川芎、白芍、生地、黃芪、旱蓮草、女貞子、益智仁等，生藥材均購自武漢市武昌區(qū)中藥材公司劉有余堂藥店，經(jīng)我院詹亞華教授鑒定為正品。所有藥材一次性水煎濃縮為125% 水煎液，用無菌玻璃瓶分裝、密封，經(jīng) Co60 照射后 4℃ 保存。給藥前在 40℃ 恒溫水溫箱中加熱備用。

Morris 水迷宮、穿梭箱實驗系統(tǒng)（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物所）、DR-HW-2 電熱恒溫水溫箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠）。切片機（Leica）、顯微鏡（Olympus）、顯微攝像系統(tǒng)。

1.3

方法

1.3.1

模型制作及給藥

VD 模型制作及術(shù)后處理按參考文獻(xiàn)[1]進(jìn)行，夾閉大鼠雙側(cè)的頸總動脈 5 min、后復(fù)灌 1 h、連續(xù) 3次、末次灌注后永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈造 VD 模型。假手術(shù)組僅分離雙側(cè)頸總動脈，既不夾閉也不結(jié)扎雙側(cè)的頸總動脈，其他與模型組相同。

動物造模成功后，適應(yīng)性飼養(yǎng) 3 d 后開始給藥：HXYZ 組 1、假手術(shù)組大鼠給予 125% 和血益智方水煎劑，Sermion 組給予 0.5 mg/100 g 思爾明混懸液、NS 組給予生理鹽水，以上各組均按 1 mL/100 g 灌胃； HXYZ 組 2 用 125% 和血益智方 2 mL/100 g 灌胃；各組動物均用藥 30 d。

1.3.2

行為學(xué)檢測

從用藥第 26 天起，分別進(jìn)行大鼠穿梭箱實驗和Morris 水迷宮實驗。

1.3.2.1

穿梭箱實驗

大鼠穿梭箱實驗每日 1 次，連續(xù) 5 d，共 5 次；每次穿梭箱實驗于當(dāng)天晚 6 時進(jìn)行，方法參考文獻(xiàn)[1]。

1.3.2.2

水迷宮實驗

Morris 水迷宮實驗每天 2 次，連續(xù) 5 d，內(nèi)容包括學(xué)習(xí)訓(xùn)練、定位航行（游泳時間設(shè)定為 120 s）、空間探索實驗（游泳時間設(shè)定為 30 s），具體操作方法同參考文獻(xiàn)[1]。Morris 水迷宮實驗于每天白天進(jìn)行。每次大鼠穿梭箱實驗和Morris 水迷宮實驗各組別順序相同。

1.3.3

病理學(xué)觀察

行為學(xué)檢測完畢，立即斷頭處死大鼠，取左側(cè)海馬甲醛固定，然后作 HE 常規(guī)染色，光鏡觀察。

1.4

統(tǒng)計方法

各組穿梭箱實驗電擊次數(shù)、電擊時間、主動回避時間和水迷宮實驗潛伏期、穿越目標(biāo)次數(shù)、路徑等指標(biāo)用 SPSS 10.0 軟件進(jìn)行 AVON（單因素方差分析）檢驗。根據(jù)方差齊與否，再選擇相應(yīng)的統(tǒng)計分析方法。

2

結(jié)

果

2.1

行為學(xué)實驗結(jié)果

2.1.1

穿梭箱實驗

和血益智方能明顯縮短 VD 大鼠主動逃避時間和遭受電擊時間，減少遭受電擊次數(shù)（表 1），與 NS 組比較有顯著性差異（P < 0.05）。但作用不如Sermion 組。

2.1.2

水迷宮實驗

經(jīng)過和血益智方治療 30 d 后，藥物組比 NS 組動物定位航行潛伏期縮短，游泳的路徑也縮短（表2）；在空間探索實驗中，30 s 內(nèi)大鼠穿越原目標(biāo)的次數(shù)增加（表 3）。上述指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計分析均有顯著性差異。它們的游泳軌跡如圖 1~5。

2.2

病理學(xué)檢測結(jié)果

光鏡下觀察：假手術(shù)組海馬 CA1 區(qū)、CA2 區(qū)、CA3 區(qū)、CA4 區(qū)以及齒狀回等各區(qū)的分子層、錐體細(xì)胞層（顆粒細(xì)胞層）、多形細(xì)胞層之細(xì)胞排列緊密有序，顆粒細(xì)胞大小一致，核圓而大，邊界及核仁可見，神經(jīng)纖維排列整齊；NS 組海馬 CA1 區(qū)細(xì)胞大小不規(guī)則，錐體細(xì)胞層層次減少，排列稀疏，細(xì)胞體積變大，有數(shù)量不等的小空泡，細(xì)胞核變小，結(jié)構(gòu)不清，核仁消失，核固縮為三角形或多角形，神經(jīng)纖維排列紊亂，神經(jīng)元脫失現(xiàn)象明顯。

其它各組海馬顆粒細(xì)胞層次有減少，但層數(shù)較模型組多，細(xì)胞排列比較密集、整齊有序，細(xì)胞缺失存在，核圓而大，邊界及核仁尚清楚，胞漿內(nèi)成分減少，神經(jīng)纖維排列不太整齊。組織病理切片提示模型組神經(jīng)元有損傷，用藥物治療后神經(jīng)元損傷有所減輕。海馬組織（HE 染色，400 倍）的病理切片如圖 6~10。

3

討

論

VD 是繼發(fā)腦血管病變的中樞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能損害，導(dǎo)致患者認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶、理解等能力下降。不同類型的記憶有不同的神經(jīng)結(jié)構(gòu)和回路參與，這些神經(jīng)結(jié)構(gòu)的血流減少或中斷，就會引起功能障礙，如不及時恢復(fù)血流，神經(jīng)細(xì)胞就會腫脹、死亡[2]。因此，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對 VD 的治療[3]包括：①治療原發(fā)腦血管?。虎诟纳颇X功能。所用的藥物如思爾明為二氫麥角堿類藥，有α受體阻斷作用，能擴(kuò)張顱內(nèi)腦血管，改善腦血流，有比較明顯的抗 VD 效果[4-6]。

VD 的證候與中醫(yī)的“呆病”、“文癡”、“健忘”、“善忘”等相當(dāng)，田玉美教授從臨床實踐觀察認(rèn)為 VD 以氣血虧虛、肝腎不足者居多，兼有痰瘀互病者亦不少見，治宜調(diào)和氣血、滋補肝腎。方中當(dāng)歸辛溫，血虛能補、血瘀能散，使氣血調(diào)和、各有所歸；川芎辛溫，活血解郁、行血中之氣；白芍微溫，和營滋陰，與當(dāng)歸、地黃同用為滋陰養(yǎng)血之良藥；生地甘寒養(yǎng)陰，與歸芍同用有補血生血之功；黃芪炙之則溫，大補元氣，填空補虛（髓），為補氣藥之長，與四物湯同用，起益氣養(yǎng)血之用；旱蓮草、女貞子甘寒補血，滋肝腎之陰；益智仁補腎益智；法夏則辛燥，降氣化濁，對本方中補氣養(yǎng)血藥起補而不滯，潤而不膩的作用，故和血益智方能調(diào)和氣血、滋補肝腎，填精生髓。

中藥藥理學(xué)研究表明川芎有擴(kuò)張腦血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集的作用；黃芪、當(dāng)歸有促進(jìn)骨髓造血、擴(kuò)張血管的作用，當(dāng)歸還有穩(wěn)定細(xì)胞膜作用；生地能增加“陰虛”動物模型腦內(nèi) M-膽堿受體的結(jié)合位點，并且可促進(jìn)“血虛”動物紅細(xì)胞、血色素的恢復(fù)，有顯著的“生血”作用；白芍有抗血小板聚集作用。黃芪對雙側(cè)頸動脈結(jié)扎所致的動物腦缺氧有顯著對抗作用，可增加小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。和血益智方抗 VD 的確切機制與生物活性成分有待進(jìn)一步研究。

（* 吳正治：博士研究生導(dǎo)師）

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篇8

【摘要】目的 探討β淀粉樣蛋白、BACE1在小鼠D-半乳糖中毒模型中的變化。方法 我們首先用D-半乳糖制做模擬Aβ代謝異常的阿爾茨海默病小鼠模型，并于用藥后90天后取分腦。取腦前用五天的水迷宮實驗在行為學(xué)上分析小鼠的記憶和學(xué)習(xí)能力。對所取分腦用Western雜交確定Aβ和BACE1蛋白的改變。結(jié)果：D-半乳糖處理的小鼠在水迷宮行為學(xué)測試中逃避潛伏期明顯延長；Aβ和BACE1的蛋白水平明顯升高。結(jié)論：D-半乳糖可誘導(dǎo)的小鼠腦中β淀粉樣蛋白、BACE1的表達(dá)增加。

【關(guān)鍵詞】D-半乳糖；β淀粉樣蛋白；β分泌酶

The expression of β-Amyloid and BACE1 were upregulated in the mouse brain treated by D-galactose

Sun Na, Liu Shiliang, Qi Shengxia

(Jiao nan Wangtai Township Health Centers, Shan Dong, Qing Dao 266425)

Objective: The aim of this study was to investigate the expression of Aβ and BACE1 in the brain of mouse treated by D-galactose. Methods:Twenty four Kunming strain mice were separated into two equal groups randomly. One group was administered D-galactose for 90d, the control group with equivalent 0.9% NaCl. Five days Morris water maze test was used to evaluate mice learning and memory at 90 days after administered D-gal or saline. BACE1 and Aβ protein level of brain was measured by western blot. Results: D-galactose treated mice exhibited significantly impaired learning in the Morris water maze. Western blot indicated that there was a tendency of increased Aβ and BACE1 expression. Conclusion: The expression of β-Amyloid and BACE1 were upregulated in the mouse brain treated by D-galactose.

Key Words:D-galactose; β-amyloid; BACE1

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease ，AD)是世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的神經(jīng)變性疾病。老年人中60－70％的進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙最終可確診為阿爾茨海默病。阿爾茨海默病的發(fā)病機制不明，其最主要的病理變化是老年斑（senile plaques）。老年斑主要是由β-淀粉樣蛋白（β amyloid, Aβ）組成的，而β淀粉樣蛋白是一種由β分泌酶(BACE1)水解淀粉樣前體蛋白(APP)產(chǎn)生的約4 kD 的小肽。我國學(xué)者最早提出腹腔注射D-半乳糖制作AD模型[1]。D-半乳糖誘導(dǎo)的鼠腦阿爾茨海默病樣改變的原因不明，本文分析評估了D－半乳糖誘導(dǎo)的阿爾茨海默病小鼠模型中Aβ及BACE1的表達(dá)情況，試圖對D-半乳糖誘導(dǎo)的這兩種蛋白的變化做初步評估。

1. 實驗材料與方法

1.1. 小鼠癡呆模型的建立

昆明種小鼠，雌雄各半，共二十四只，體重20±2g, 由南京市江寧試驗動物中心提供，標(biāo)準(zhǔn)鼠飼料常規(guī)喂養(yǎng)。二十四只小鼠先按雌雄隨機分組，然后隨機選取一組雌鼠及雄鼠作為加藥處理組，另一組作為對照組，加藥組頸背部皮下注射D-半乳糖（90mg/kg）每天1次。對照組頸背部皮下注射等量生理鹽水。在用藥90天時間點對兩組小鼠行水迷宮試驗評估智能狀態(tài)。

1.2. 水迷宮實驗

Morris 水迷宮：圓形水池直徑為120cm, 高60cm, 平臺高度50cm, 直徑10cm, 平臺低于水面1cm, 水溫25±1℃, 水的表面覆蓋白色塑料泡沫顆粒。實驗期間迷宮外參照物保持不變。實驗前1天，讓小鼠熟悉水迷宮環(huán)境。實驗歷時5天，每天訓(xùn)練1次，分別從東、南、西、北4個點入水，入水時，小鼠面向池壁，記錄小鼠找到平臺所需時間即逃避潛伏期。

1.3. Western blotting

選取海馬用蛋白裂解液提取總蛋白質(zhì)，用Brad―ford方法測寵蛋白質(zhì)濃度。蛋白采用8-10％SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳送行分離，然后轉(zhuǎn)至PVDF膜上，室溫下?lián)u動封閉2h(TBS-T加5％脫脂奶粉)，加入抗BACE1 (Mab5308，Chemicon， 1：1000) 或Aβ單抗(4G8，44-356， Biosource，1：1000)；鼠源 anti-GAPDH antibody (SANTA CRUZ, Europe，1：1000)包被抗體；PBST洗膜后加入1ml 1：2000 IgG-HRP抗體；PBST洗膜； ECL plus Western Blotting Detection System 試劑盒檢測蛋白表達(dá)水平。以bandscan圖像處理系統(tǒng)對膠片翔描測定感光區(qū)帶的感光密度，根據(jù)曝光條帶判斷蛋白的表達(dá)結(jié)果。

1.4. 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用平均±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行為學(xué)測試及所有相關(guān)分子檢測數(shù)據(jù)均采用雙尾獨立t檢驗，統(tǒng)計顯著性設(shè)置為P

2. 實驗結(jié)果

2.1. D-半乳糖處理后小鼠行為學(xué)的變化

用D-半乳糖(D-gal)處理的模型組小鼠90天時平均逃避潛伏期(19.1±4.78s)明顯比生理鹽水(Saline)對照組(14.87±3.64s)長(n=12; p

2.2. Aβ和BACE1蛋白表達(dá)的變化

我們用Western blotting的方法檢測了Aβ和BACE1在海馬中的含量。在D-半乳糖處理組中，給藥組Aβ的蛋白含量顯著高于對照組；給藥組BACE1的蛋白含量顯著高于對照組，表1。

3. 討論

自從Alois Alzheimer在1907年報道了首例老年癡呆癥患者的腦部變化到1984年George Glenner分離出β淀粉樣蛋白后的20年間，“β淀粉樣蛋白”假說得到了越來越多的證據(jù)支持[2]。其基本觀點為：Aβ的沉積是AD發(fā)病的始發(fā)因素， Aβ在大腦內(nèi)的清除速率小于其產(chǎn)生速率而導(dǎo)致其在大腦內(nèi)的沉積是AD相關(guān)病理的主要發(fā)病機制。該假說有著眾多的遺傳學(xué)，分子學(xué)，生物化學(xué)和神經(jīng)病理學(xué)的發(fā)現(xiàn)作基礎(chǔ)。但阿爾茨海默病的原發(fā)性病理生理變化尚不清楚。動物長期注射D-半乳糖后，后者血清濃度將維持在一個較高的水平，其代謝產(chǎn)物半乳糖醇不能被代謝而在細(xì)胞內(nèi)堆積，影響滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，代謝紊亂。D-半乳糖還引起腦神經(jīng)元的一系列退行性改變，如神經(jīng)元數(shù)目減少、腦組織中超氧化物歧化酶活性下降、丙二醛和脂褐素水平升高[1]。本實驗中我們重點考察了D-半乳糖誘導(dǎo)的鼠腦中Aβ和Aβ代謝途徑中的關(guān)鍵酶BACE1的表達(dá)情況。

在我們的實驗中小鼠海馬A和BACE1在給藥90天后顯著升高。BACE1是A合成的限速酶。有研究提示在BACE1表達(dá)缺陷的轉(zhuǎn)基因鼠中A相關(guān)病理改變?nèi)笔3]。BACE1水平在AD患者及AD動物模型中均有提高[4]。我們的研究顯示BACE1水平在給藥組有明顯升高。這就提示D-半乳糖可能通過誘導(dǎo)BACE1的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)鼠腦中β淀粉樣蛋白的蓄積，從而引起小鼠腦組織的一系列退行性改變，最終導(dǎo)致智能的減退。實驗結(jié)果還提示如果能找到一種檢測患者腦組織中BACE1水平的方法就可以對AD進(jìn)行早期診斷，對阿爾茨海默病的診斷和治療將具有重要作用。

參考文獻(xiàn)

[1] Shang YZ，Gong MY，Zhou XX，Li sr，Wang BY．Improving efects of SSF on memory deficits and pathological changes of neural and immunological system in senescent mice．Acta Pharmacol Sin (2001) 22(12)：1078―108

[2] Tanzi,R.E. and Bertram,L., Twenty years of the Alzheimer's disease amyloid hypothesis: A genetic perspective, Cell, 120 (2005) 545-555.

[3] Ohno, M., Cole, S.L., Yasvoina, M., Zhao, J., Citron, M., Berry, R., Disterhoft,J.F., Vassar, R.,2007.BACE1 gene deletion prevents neuron loss and memory deficits in 5XFAD APP/PS1 transgenic mice. Neurobiol.Dis. 26,134145.

篇9

關(guān)鍵詞: 癲癇；ERK ； NF-κB； 托吡酯

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1004-7484（2012）06-0100-03

作為神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病之一，癲癇在我國的發(fā)病率已超過7‰,目前研究表明，癲癇的發(fā)生于離子通道、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)遞質(zhì)都有密切關(guān)系[1]。現(xiàn)有的藥物已能在很大程度上控制癲癇的急性發(fā)作，但是癲癇反復(fù)發(fā)作后會造成一定程度腦損傷，導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡以及功能失調(diào)，尚不能完全解決[2]。托吡酯(TPM)是由氨基磺酸酯取代單糖的新型抗癲癇藥物，能通過切斷鈉通道，提高GABA激活受體的頻率。有研究表明，TPM還具有保護(hù)神經(jīng)元作用，其機制尚未明確[3]。本實驗通過復(fù)制急性癲癇大鼠模型，并通過觀察癲癇大鼠行為學(xué)，探討TPM的干預(yù)作用，最后通過免疫印跡法，觀察ERK蛋白的磷酸化及下游NF-κB 蛋白表達(dá)的變化，進(jìn)一步探討TPM對神經(jīng)元的保護(hù)作用的可能機制，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗分組給藥及癲癇模型的制備

健康清潔級成年wistar大鼠實驗36只，雌雄不限，體重(200 ±30)g,實驗分組見表1

組別 n 給藥方式

對照組 5 腹腔注射5ml生理鹽水

氯化鋰―匹羅卡品組

(處理組) 6 腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品

TPM低劑量組 7 腹腔注射TPM20 mg/kg，

1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品

TPM中劑量組 7 腹腔注射TPM40 mg/kg

1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品

TPM高劑量組 7 腹腔注射TPM80 mg/kg

1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品

1.2行為學(xué)觀察

腹腔內(nèi)注射后連續(xù)觀察大鼠行為, 并記錄癲癇發(fā)作的潛伏期、 發(fā)作程度和持續(xù)時間, 參考 Racine 分級標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.3 取材及白提取及蛋白樣本制備

發(fā)作后0.5h，將中劑量TPM干預(yù)組中4只及處理組中3只大鼠予戊巴比妥鈉 (80 mg/kg)深麻醉, 迅速斷頭、咬開顱骨、剝出雙側(cè)海馬；發(fā)作后2.5h，照以上方法處死剩余動物并取材。

組織白提取試劑盒購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司，將組織勻漿后按試劑盒要求提取白。

1.4western blot檢測ERK磷酸化水平和NF-κB 蛋白活化

用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕法轉(zhuǎn)膜，含5%脫脂奶粉的PBS封閉液封閉1h后加入一抗，4oc孵育過夜，洗膜后加入熒光素標(biāo)記的二抗37oc孵育1h。采用GAPDH作為內(nèi)參，用LI-COR Odyssey進(jìn)行熒光顯色并計算條帶灰度值。實驗均重復(fù)至少3次。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

運用SPSS 10.0軟件，進(jìn)行單因素方差分析，顯著性水平P

2 結(jié)果

TPM對氯化鋰― 匹羅卡品誘導(dǎo)的大鼠行為學(xué)的影響

生理鹽水組無癲癇發(fā)作；匹魯卡品注射后15~18min后出現(xiàn)癲癇III ~I V級發(fā)作，6只大鼠出現(xiàn)強直陣攣，3~4h后發(fā)作停止；不同劑量TPM干預(yù)組的發(fā)作程度明顯減輕，只在低劑量組有一只I V級發(fā)作。采用SPSS進(jìn)行Ridit分析，匹魯卡品組R=0.000，TPM低劑量組R=0.3180(P

2.2.1 western blot檢測p-ERK水平和NF-κB 蛋白活化的變化

0.5h時間點樣品中，與空白對照組相比，各組ERK磷酸化和NF-κB 蛋白活化水平均明顯增高，有極顯著差異（P

與0.5h時間點樣品相比，2.5h時間點磷酸化水平和活化水平下降，有顯著差異（P

圖 1 圖2

圖3

3討論

托吡酯 (TPM)( 2. 3∶4. 5-雙氧-1-甲基亞乙基-- D-硫酸果糖)是從果糖的D型鏡像體中提取出的一種新型的抗癲癇藥。在對體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞元進(jìn)行電生理和生化研究中發(fā)現(xiàn)托吡酯的抗癲癇作用與阻斷神經(jīng)元異常放電，調(diào)節(jié)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)與興奮性神經(jīng)遞質(zhì)活性都有關(guān)系。

促有分裂原活化蛋白激酶 (Mitogen- activatedprotein kinases ,MAPKs) 家族 ,是將細(xì)胞表面信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞核的重要傳遞者。目前已知的MAPK通路主要有三組：ERK1/2(細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶)MAPK家族，P38MAPK家族，JUK/SAPKMAPK家族。已知后兩類通路的激活參與細(xì)胞凋亡過程及炎性反應(yīng)。ERK信號通路主要參與細(xì)胞生長增殖與分化，而ERK通路的持續(xù)激活可以阻止細(xì)胞凋亡的發(fā)生[4]。

Kawasaki[2]在1997年的研究中也已發(fā)現(xiàn)，在急性癲癇發(fā)作的大鼠模型小腦顆粒細(xì)胞中MAPK家族的三個成員均被激活，而 P38MAPK和JUN的激活是一過性的，而ERK的活性水平在3h后仍未回到基本水平。

本實驗中，處理組的結(jié)果與Kawasaki報道中的大致相同，ERK通路在急性發(fā)作0.5h后已被激活，2.5h后仍未回到基準(zhǔn)水平。由于ERKs通路的主要功能對細(xì)胞增殖、分化與維持存活至關(guān)重要?？梢酝葡隕RKs的持續(xù)磷酸化可能是細(xì)胞遭受損害后的一種內(nèi)在保護(hù)機制。

而TPM干預(yù)組中，急性發(fā)作2.5h后的ERKs磷酸化水平中高劑量組與處理組相比有明顯升高，與低劑量組亦有顯著性差異，中劑量組與高劑量組間無顯著性差異；中劑量組中，急性發(fā)作2.5h后與0.5h時相比，ERK磷酸化水平雖有下降，但與2.5h時處理組相比，仍有顯著升高。這說明TPM干預(yù)后ERK通路被持續(xù)激活，參與保護(hù)癲癇反復(fù)發(fā)作中易損的腦神經(jīng)元。

核轉(zhuǎn)錄因子( nuclear factor-κB, NF-κB)是一種廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，是將胞漿內(nèi)的信號傳導(dǎo)至核內(nèi)的重要媒介。由于NF-κB在細(xì)胞死亡時活化增強，故多年來認(rèn)為NF-κB是導(dǎo)致細(xì)胞死亡的因素[2]。然而目前認(rèn)為這種觀點有欠缺，NF-κB活化增強是由于系統(tǒng)受損后細(xì)胞保護(hù)信號通路被激活，從而起到防止細(xì)胞死亡的作用。研究表明，MAPKs可通過磷酸化NF-κB發(fā)揮其調(diào)控功能[3]。

本實驗中，急性癲癇發(fā)作后，處理組與生理鹽水對照組相比，細(xì)胞核內(nèi)活化的NF-кB明顯增高；而2.5h后與0.5h相比水平下降，這可能與ERK通路磷酸化水平下降相關(guān)，說明ERK通路與NF-кB之間有相互影響的作用。TPM干預(yù)組中，中劑量和高劑量干預(yù)組與低劑量及處理組相比，NF-кB一直保持較高活化水平，可能與ERK通路激活水平較高有關(guān)，這證實了TMP的保護(hù)作用；而中劑量組中，2.5h與0.5h相比，NF-кB活化水平下降應(yīng)該與JNK通路的失活的影響有關(guān)。

綜上所述，ERK通路在大鼠癲癇急性發(fā)作的海馬體中能被激活，自發(fā)保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞阻止凋亡，NF-кB參與此過程；而托吡酯能將激活的持續(xù)時間延長，激活的后續(xù)水平提高，這可能是TPM保護(hù)作用的重要機制。

參考文獻(xiàn)

[1] 臧穎卓,范亞林,李虹等.癲癇發(fā)病機制的研究現(xiàn)狀[J].腦與神經(jīng)疾病雜志,2009,17(1):78～80,封3.

篇10

關(guān)鍵詞：文化；人類學(xué)；危機；生命文化學(xué)

眾所周知，人類學(xué)家宣稱，人類學(xué)是關(guān)于人類歷史的科學(xué)。美國的人類學(xué)研究傳統(tǒng)分為四支（特別是在Boasians的研究推動之后）：生物人類學(xué)、考古人類學(xué)、語言人類學(xué)和文化人類學(xué)[1]。Robert Borofski（2002）的研究揭示出來，在文化人類學(xué)的子分支之間的聯(lián)系已經(jīng)非常薄弱[2]。人類學(xué)的分支越來越專一化。過度的專業(yè)化是人類學(xué)面臨的一個問題。

人類學(xué)面臨的第二個問題是“文化”這個詞本身。20世紀(jì)初，人類學(xué)家把人類學(xué)界定為關(guān)于文化的科學(xué)，而現(xiàn)在人類學(xué)家逐漸變?yōu)槲幕芯糠矫娴膶＜襕3]。人類學(xué)家把文化界定為他們用來研究世界上不同人類群體的生活方式的理論、認(rèn)識論和方法論的工具。大量關(guān)于文化的概念起源于20世紀(jì)的上半個世紀(jì)[4]。盡管文化的概念眾多并且沒有確立一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，但是人類學(xué)家普遍承認(rèn)這樣的假設(shè)：文化是后天習(xí)得的，基于符號的歷史產(chǎn)物。換句話說，文化與自然相對，擁有自己存在和進(jìn)化的方式。

而到了20世紀(jì)下半葉，文化達(dá)到了一種濫用的程度，尤其是被“種族中心論”的人誤用。Adam Kuper陳述了它的成功：“現(xiàn)在每個人都進(jìn)入到文化中來?！盵5]換句話說，我們正在見證這個世界的文化膨脹。

Keesing在1974年預(yù)測了未來的研究熱點：“‘雅諾馬米文化’、‘日語文化’、‘文化的發(fā)展’、‘自然與文化’：我們的人類學(xué)家仍然使用這個詞，我們?nèi)匀徽J(rèn)為這意味著什么。但是從靈長類動物存在的學(xué)習(xí)傳統(tǒng)，使用工具和操縱符號，我們再也不那么肯定文化符號的習(xí)得性遺傳是人類所獨有的了?！?/p>

僅僅一年后，Edward Wilson出版了《社會生物學(xué)：新的綜合》。他定義社會生物學(xué)為“所有社會行為生物學(xué)基礎(chǔ)的系統(tǒng)研究。[6]”同時，他宣稱社會生物學(xué)的目的是“利用當(dāng)代綜合進(jìn)化論的成果重新規(guī)劃社會科學(xué)。[7]”

自從70年代以來，所謂的進(jìn)化派社會科學(xué)一直在學(xué)術(shù)界中發(fā)展和傳播。我用“進(jìn)化的社會科學(xué)”這一標(biāo)簽來稱謂用進(jìn)化論的方法來研究人類文化的那一派研究。這個標(biāo)簽反映了在科學(xué)和社會科學(xué)研究前沿的交叉，現(xiàn)在有很多學(xué)者使用這個詞。在進(jìn)化的社會科學(xué)領(lǐng)域最先進(jìn)的無疑是社會生物學(xué)、進(jìn)化心理學(xué)、人類行為生態(tài)學(xué)，人類行為學(xué)，模因論、以及“基因――文化”共同進(jìn)化的的方法。上述學(xué)科的代表發(fā)展了他們自己關(guān)于文化的概念，我們稱之為文化進(jìn)化論。

那么，早期文化人類學(xué)家把文化定義為一種后天習(xí)得的基于符號的歷史產(chǎn)物，而社會生物學(xué)家的定義則是完全對立的，他們認(rèn)為文化是一種生物學(xué)上的適應(yīng)性，或者說文化是符合“自私的基因”的利益的。進(jìn)化心理學(xué)和人類行為學(xué)中也有關(guān)于文化的類似表達(dá)。

人類行為生態(tài)學(xué)和“基因――文化”共同進(jìn)化理論，都在文化人類學(xué)對立的角度使用文化的概念，但是在研究方法上兩者有所不同。他們認(rèn)為文化不是生物適應(yīng)的產(chǎn)物，基因并不能操縱文化。

在行為生態(tài)學(xué)中文化是在某種特定的生態(tài)環(huán)境下生物最大化自己繁殖度的適應(yīng)性策略。他們在人類行為的水平上研究文化；他們認(rèn)為文化是一種對于當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境和社會文化環(huán)境的適應(yīng)型策略（SmithWinterhalder1992）.那么，文化是一種行為的適應(yīng)性。

共同進(jìn)化方法包括基因和文化之間的相互動力系統(tǒng)。例如，William Durham已經(jīng)列出了基因與文化作用的五種關(guān)系（1991）：cultural mediation（文化調(diào)節(jié)），genetic mediation（基因調(diào)節(jié)），enhancement（增強），neutrality（中立）and opposition（反對）.前三種是互動的，后兩種是比較的（Durham 1991，205207）?？傊J(rèn)為兩者在互動中可能會影響到對方?；蚺c文化的關(guān)系將參照：（1）相同的目標(biāo)（增強）；（2）矛盾的目標(biāo)（反對）；（3）不同，但目標(biāo)并不矛盾（中立）。文化不能解釋為基因進(jìn)化的產(chǎn)物。在協(xié)同進(jìn)化理論中，文化是基因與社會文化環(huán)境協(xié)同進(jìn)化的產(chǎn)物。

在前面的論述中，我概述了目前的被看作是整體科學(xué)的人類學(xué)中的危機。首先是，人類學(xué)的過度強調(diào)分支化和跨人類學(xué)的薄弱的合作性。其次，危機的根源是，文化概念在人類學(xué)中的滑坡，它被指責(zé)將西方的工具加在非西方的社會中的一種中心主義的建構(gòu)。第三個根源是，“文化”這個概念的膨脹，人類學(xué)成功地給出“模因”，并認(rèn)為它承載了一個更為寬泛的意義，它最終將涵括任何東西。并且如果是在這種意義上，文化實際上是一個空洞的詞匯。危機的最后一個根源是，在進(jìn)化社會科學(xué)中對文化這個概念的寬泛的討論。它的表征是從人類學(xué)意義上來使用這個概念，但是一般來說，這并不是一個合適的背景。

基于文化學(xué)理論框架的生命文化學(xué)，方便了人們對進(jìn)化社會科學(xué)和人類學(xué)的理解，生命文化學(xué)是一個文化學(xué)的分支。生命文化學(xué)這個概念是由美國人類學(xué)家伊諾?若斯在1980年提出的，它是一個物理人類的分支的標(biāo)簽，主要是從文化人類學(xué)的觀點，來關(guān)注文化和生物現(xiàn)象。生命文化進(jìn)化從文化屬于非生物學(xué)的適應(yīng)性這個前提出發(fā)，將人類與其它生物區(qū)分開來，但是它并不意味著，人類獨立于他過去的進(jìn)化。

相反，文化有它進(jìn)化的根源，人類是被他的特征所決定的，并且建立在人類基因的生物進(jìn)化過程中。另外，生命文化學(xué)處理一種更為寬泛的主題包括動物和人類的不同。生命文化學(xué)進(jìn)一步研究的是生物和文化適應(yīng)性及進(jìn)化之間的關(guān)系，分析社會生活的主要因素，并關(guān)注后天PK先天討論的結(jié)論。生命文化學(xué)可以從文化人類學(xué)的傳統(tǒng)這一方面和從進(jìn)化社會學(xué)另一方面，為了支持人類作為生命文化個體的整合性研究。簡單來講，生命文化學(xué)采用了從科學(xué)和社會科學(xué)中認(rèn)識的相關(guān)的發(fā)現(xiàn)并從文化角度來進(jìn)行解釋。

生命文化學(xué)對于目前的人類學(xué)在三個方面的難題起作用。首先，生命文化學(xué)支持科學(xué)和社會科學(xué)的交叉性學(xué)科的合作性研究。其次，它將文化看作是在科學(xué)對人的研究中理論上、認(rèn)識論上和方法論上的工具。最后，它方便了對人類學(xué)和進(jìn)化論方法在文化的研究上，對人類本質(zhì)的二分的難題的克服。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Kuper，Adam（2000）：Culture：Anthropologists’Account.Cambridge：Harvard University Press.

[2]Kuper，Adam（2000）：Culture：Anthropologists’Account.Cambridge：Harvard University Press.

[3]Borofski，Robert（2002）：The Four Subfields：Anthropologists as Mythmakers.American Anthropologist，104（2），s.463480.